人细胞色素C(CYT-C)ELISA KIT的操作步骤是什么? ¹

人细胞色素C(CYT-C)ELISA KIT是一种采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)的检测方法。该方法通过在预先包被抗原的包被微孔中加入标本、标准品和HRP标记的检测抗原，经过一系列操作流程，可以检测出待测样本中人细胞色素C的含量。

人细胞色素C(CYT-C)是一种重要的线粒体蛋白，参与细胞呼吸链和凋亡途径。

该检测方法的应用领域有哪些？

该方法在大黄素对人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡及Cyt C、Smac表达的影响研究中的应用

该研究旨在观察大黄素在体外对肝癌细胞凋亡以及线粒体细胞色素C（Cytochrome C,Cyt C）和线粒体促凋亡蛋白Smac/DIABLO（Smac）表达水平的影响，进一步探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的机制。

研究方法：首先培养人肝癌SMMC-7721细胞株，然后将细胞分为不同组别，分别用不同浓度的大黄素进行处理，并设置阳性对照组。通过流式细胞仪、荧光定量PCR和蛋白印迹技术等方法，检测细胞凋亡率、Cyt C和Smac mRNA的表达以及Cyt C和Smac蛋白的表达情况。

研究结果显示，大黄素处理后的肝癌细胞早期凋亡率增高，活细胞率减少。同时，Cyt C和Smac mRNA的表达增强，Cyt C和Smac蛋白的表达也增加。这表明大黄素通过促进Cyt C和Smac的转录合成，并促进它们从线粒体膜间隙向细胞质内的释放，从而通过线粒体Caspase依赖凋亡通路诱导肝癌细胞凋亡，发挥抗肿瘤作用。

参考文献

[1] Emodin-Induced Generation of Reactive Oxygen Species Inhibits RhoA Activation to Sensitize Gastric Carcinoma Cells to Anoikis[J]. Jun Cai, Xin Niu, Yuying Chen, Qingshen Hu, Guiying Shi, Huacheng Wu, Jian Wang, Jing Yi. Neoplasia. 2008(1)

[2] Emodin induces apoptosis through caspase 3-dependent pathway in HK-2 cells[J]. Cuifen Wang, Xudong Wu, Min Chen, Weigang Duan, Lixin Sun, Ming Yan, Luyong Zhang. Toxicology. 2007(2)

[3] Anthraquinone derivative emodin inhibits tumor-associated angiogenesis through inhibition of extracellular signal-regulated kinase 1/2 phosphorylation[J]. Tatsuya Kaneshiro, Takamitsu Morioka, Morihiko Inamine, Tatsuya Kinjo, Junya Arakaki, Itaru Chiba, Nao Sunagawa, Masumi Suzui, Naoki Yoshimi. European Journal of Pharmacology. 2006(1)

[4] Therapeutic targeting of the tumor microenvironment[J]. Johanna A. Joyce. Cancer Cell. 2005(6)

[5] 杨阿莉. 大黄素对人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡及Cyt C、Smac表达的影响[D]. 中南大学, 2010.