如何制备精氨酸衍生物Fmoc-Arg(Pbf)-OH? ¹

L-精氨酸甲酯二盐酸盐（Arg·Oet·2HCl）是一种重要的中间体，可用于制备精氨酸衍生物Fmoc-Arg(Pbf)-OH。

制备方法

以下是制备精氨酸衍生物Fmoc-Arg(Pbf)-OH的步骤：

a1. 在预先干燥的反应釜内加入100L无水乙醇，通过通入冰盐水降温至-5～-10℃，然后滴加13L二氯亚砜。

b1. 加入21.5kg的D型Arg.HCl，关闭冰盐水，让温度自然升至室温，反应24小时。

c1. 升温至35℃，使用TLC点板跟踪反应情况，大约48小时后反应结束。

d1. 反应结束后，进行浓缩，减压浓缩得到L-精氨酸甲酯二盐酸盐的油状物中间体。

应用

精氨酸甲酯二盐酸盐可用于制备精氨酸衍生物Fmoc-Arg(Pbf)-OH。

制备方法如下：

(1) 引入Boc基团

a2. 在反应釜内加入150L水，然后加入25.2kg碳酸氢钠，搅拌。逐渐加入L-精氨酸甲酯二盐酸盐油状物，再加入30L四氢呋喃。分批加入26.2kg的(Boc)₂O，室温下搅拌反应。

TLC法点板跟踪反应情况，当Arg·Oet·2HCl反应完即开始处理。

b2. 酸化：反应完成后，调节pH至3-4，使用石油醚/乙酸乙酯(50L:25L)进行萃取。

c2. 加盐饱和，回调pH至6-7，使用乙酸乙酯提取产品，然后用饱和食盐水洗涤有机相。

d2. 干燥：向有机相中加入60kg无水硫酸钠，干燥8小时。然后进行提纯浓缩，抽滤掉硫酸钠固体，减压蒸馏乙酸乙酯相，得到Boc-ArgOet.HCl的油状物。

(2) 引入Pbf

a3. 在反应釜中加入步骤2得到的Boc-ArgOet.HCl，31.9kg的Pbf-Cl，200L丙酮，41.7kg碳酸钾，搅拌。加入少量水，维持温度在40-45℃，使用TLC监测反应。待Boc-ArgOet.HCl完全反应后进行抽滤。

b3. 抽滤，除去固体不溶物，减压蒸馏丙酮，浓缩后得到Boc-Arg(Pbf)Oet的油状物。

(3) 脱Boc

a4. 在干燥的反应釜中，加入120L的3N HCl/乙酸乙酯溶液，搅拌后加入Boc-Arg(Pbf)Oet的油状物，维持温度在10-15℃，室温搅拌。

b4. 脱Boc完成后，进行水洗涤，将产品洗至水相，然后加入适量碳酸钠调节水相的pH至7。

(4) 皂化

a5. 将步骤(4)所得水相加入100L的95％乙醇，搅拌后滴加10N NaOH水溶液，调节pH至11-12进行皂化。

b5. 皂化反应结束后，使用6NHCl调节反应液的pH至7，降温至-10-0℃进行冷冻结晶。然后进行离心，用乙酸乙酯搅洗固体一次，再次离心甩干，收集固体。最后进行重结晶，得到H-Arg(Pbf)OH固体。

(5) Fmoc-Arg(Pbf)-OH合成

a6. 在反应釜中加入H-Arg(Pbf)-OH，120L水和THF，使用Na₂CO₃调节pH为8.5。

b6. 逐渐加入Fmoc-Osu，控制温度在15-20℃，pH为8-9，使Arg(Pbf)完全反应，尽量避免Fmoc-Osu过量。

TLC点板跟踪反应情况，从加完Fmoc-Osu开始计算，反应时间为6小时。

c6. 纯化：使用石油醚/乙酸乙酯(2:1)进行萃取，然后将水相酸化至pH为3，搅拌2小时。酸化温度为0-10℃。使用乙酸乙酯萃取产品，用饱和食盐水洗至pH达到6。使用无水硫酸钠干燥，进行真空抽滤除去固体，浓缩滤液，减压浓缩得到固体，最后进行真空干燥得到产品。

该产品的纯度为99.6％，最大单杂为0.09％，L型异构体为0.15％。

参考文献

[1] [中国发明,中国发明授权] CN201710305099.X Fmoc?Arg（Pbf）?OH的合成方法【公开】/Fmoc-Arg（Pbf）-OH的合成方法【授权】