人17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA试剂盒的应用及操作步骤？ ¹

背景信息

人17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA试剂盒是一种用于定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人17-羟皮质类固醇（17-OHCS）含量的试剂盒。

该试剂盒利用双抗体夹心法测定标本中人17-羟皮质类固醇(17-OHCS)水平。首先，将纯化的人17-羟皮质类固醇(17-OHCS)抗体包被在微孔板上，形成固相抗体。然后，依次加入17-羟皮质类固醇(17-OHCS)样本和HRP标记的17-OHCS抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后，加入底物TMB进行显色反应。

显色反应中，TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，然后在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中的17-羟皮质类固醇(17-OHCS)浓度呈正相关。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，可以计算出样品中人17-羟皮质类固醇(17-OHCS)的浓度。

试剂盒操作步骤

1。从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2。设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。

3。样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4。除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5。弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次。

6。每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7。每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用领域

用于肾虚型慢性再生障碍性贫血小鼠模型建立研究

该试剂盒可用于建立肾虚型慢性再生障碍性贫血（chronic aplastic anemia,CAA）小鼠模型。

具体方法：通过体能测试筛选出体能相近的小鼠，并随机分成肾阴虚组、肾阳虚组和正常组。在模型建立的基础上，给予相应药物介入，观察小鼠的生活状态，并通过ELISA试剂盒测定血清中的相关指标。

参考文献

[1]Benzene metabolites block gap junction intercellular communication[J].Edgar Rivedal,Gisela Witz.Chemico-Biological Interactions.2005

[2]RECENT DEVELOPMENTS IN THE UNDERSTANDING OF BENZENE TOXICITY AND LEUKEMOGENESIS[J].Robert Snyder.Drug and Chemical Toxicology.2000(1)

[3]The cytokine network in asthma and chronic obstructive pulmonary disease[J].Barnes,Peter J.Journal of Clinical Investigation.2008(11)

[4]Regulatory T Cells in Allergy and Asthma[J].Mark Larché.Chest.2007(3)

[5][1]吴逢选,王晓燕,陈鑫丽,吴婷婷,梁哲彬,刘军平,吴迪炯,叶宝东.肾虚型慢性再生障碍性贫血小鼠模型建立[J].中国中西医结合杂志,2017,37(09):1095-1099.