最近在做WB,用的是膜蛋白,现在想用内参检测下上样量是否相等,可是没找到合适的蛋白做内参。搜了关于内参的帖子,发现很多人都有我这样的疑惑,而且众说纷纭,没有一个统一的说法。关于是否可以用β-actin 和 GAPDH 做膜蛋白的内参大家也是各持其见1.不支持的:认为β-actin 和GAPDH是在胞浆中表达的,膜中应该不含有该成分,故不能用来做内部参照,可以用来检测所提的膜蛋白是否纯2.支持的:他们通过实践行动证实,用β-actin或GAPDH孵育膜可以得到条带本人倾向于第一种观点,查了些资料,都是说β-actin 和GAPDH是在胞浆中表达的,所以说就算是用上述两种内参孵育出条带也只是说明所提的膜蛋白成分不纯,含有胞浆成分,本人用β-actin孵育过膜,曝光后有相应条带出现,但很淡,但也证实用β-actin做膜蛋白的内参是确实是可以出条带的,但我的理解是膜蛋白成分不纯,含有胞浆成分我看过两篇外文文献,用的是膜蛋白做WB,一篇是用actin做内参,04年发表在Am J Physiol Cell Physiol 上的。另一篇是用GAPDH,08年发表在 brain research上的,严格来说他不是用来做内参,只是检测膜蛋白成分是否纯,在此,希望大家充分发表自己的意见,充分讨论:1.膜蛋白是否可以用β-actin 和GAPDH做内参?2.很多人用β-actin 和GAPDH做内参时出来的条带是否是由于膜蛋白不纯,含有胞浆成分?如果是的话,是否可以用β-actin 和GAPDH做膜蛋白的内参呢?如果不是的话,是否细胞膜中本身就含有actin ?3.细胞膜上是否有像β-actin 和GAPDH一样的看家蛋白可做内参?欢迎大家不吝赐教,踊跃发言,把好的文献一起分享!