293细胞转染时siRNA与Lipofectamine2000的比例？

最近开始做siRNA转染，遇到了很多问题，恳请各位转染大神帮助！
我要转染的细胞系是转染最常用293细胞，转染体系是6孔板和6 cm皿，目的是要敲低一个分子量300多kD的蛋白质，siRNA和Lipofectamine2000均是购买而得。转染前检测了siRNA的量，确定没有降解。EP管和kit均是无RNA酶的。转染过程中使用的培养基是OPTI-MEM，种293细胞及换液用的培养基均为不含青链霉素的10%FBS的MEM培养基，293细胞汇合度为80%~90%。
根据说明书的推荐用量（75 pmol siRNA:7.5 uL Lipo2000）、做过尝试，转染6 h后换液，24 h、48 h后通过IF检测目标蛋白的表达（因为实验需要一些荧光照片，鉴于已有抗体的局限性，未对siRNA进行荧光标记），但是都没有达到转染效果。