缓冲液是一种含有弱酸及其盐的溶液,用于提供酶反应的有利环境。不同酶反应需要不同种类、浓度和pH的缓冲离子,因此每种酶反应都有其最适合的缓冲液。Hank's液是生物学实验中最常用的平衡盐溶液,主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗以及配制其他试剂等。与Hank's液相比,D-Hank's缓冲液不含钙和镁离子,因此可用于配制胰蛋白酶消化液,而钙镁离子会抑制胰蛋白酶的活性。此外,D-Hanks缓冲液中的酚红起到pH指示作用。
D-Hanks缓冲液(含酚红)是一种供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料。它包含碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、维生素和水等成分。有些培养基还可能含有抗菌素和色素。
使用D-Hanks缓冲液(含酚红)的步骤如下:
(一)准确称量试剂:选择适宜的培养基,并确保所需试剂的纯度。
(二)校正pH值:将称量好的培养基成分放入容器内,加热溶解并补充水分,使用精密试纸或酸度计测定酸碱度。使用1NNaOH和1NHCl调节pH值到适宜范围。
(三)过滤:将玻璃漏斗置于铁架上,使用D-Hanks缓冲液纱布夹棉花或滤纸放在漏斗中,将培养基倒入其中并过滤至透明。
(四)分装:将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内,每支试管装5mL,三角瓶中装100~150mL。塞好棉塞并用牛皮纸包扎好,准备灭菌。
(五)灭菌:常用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。高压蒸汽灭菌法比干热灭菌法效果更好,因为在同一温度条件下,蒸汽的穿透力更强,能够更好地杀灭微生物。
[1] 协和医学词典