16HBE人支气管上皮样细胞的保存方法及注意事项？ ¹

背景^[1]

16HBE人支气管上皮样细胞是从一名正常人的支气管上皮组织中获得的。经过Ad12SV40病毒感染和克隆后，这些细胞可用于检测化学和生物制剂的致癌作用。

保存方法^[1]

为了有效保存16HBE人支气管上皮样细胞，有两种冷冻保存方法可供选择。第一种方法是将冷冻管置于4℃的环境中300分钟，然后转移到-20℃的环境中30分钟，最后放入-80℃的液氮槽中长期储存。第二种方法是将冷冻管置于可程序降温机中，每分钟降低1-3℃，直到达到-80℃以下，然后放入液氮槽中储存。在这两种方法中，需要注意的是在-20℃环境中的保存时间不可超过1小时，以防止细胞大量死亡。此外，还可以直接将细胞放入-80℃的冰箱中，但存活率会稍微降低。

目前，我们公司收录了1420株背景资料清晰、细胞活力状态良好的16HBE人支气管上皮样细胞株。其中，绝大部分细胞株是近年来从美国ATCC和NIH引进的，少部分来自全国各地的细胞研究所。这些细胞株的来源可靠，背景资料清晰，代数年轻，活力良好。

注意事项^[1]

在操作16HBE人支气管上皮样细胞之前，需要注意以下事项：

1. 操作前要洗手，并在进入超净台后使用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦拭手部。同时，也要擦拭试剂瓶口。
2. 点燃酒精灯，并在火焰附近进行操作。耐热物品需要经常在火焰上烧灼，但金属器械的烧灼时间不能太长，以免退火。在夹取组织之前，需要等待其冷却。已吸取过营养液的用具不能再次烧灼，以免形成碳膜。
3. 操作动作要准确敏捷，但又不能过快，以防止空气流动，增加污染机会。
4. 不要用手触摸已消毒的器皿的工作部分，工作台面上的用品布局要合理。
5. 瓶子开口后要尽量保持45℃斜位。
6. 吸溶液的吸管等不能混用。

细胞处理：

在处理16HBE人支气管上皮样细胞时，需要进行以下步骤：

1. 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中，摇晃解冻。然后将解冻后的细胞悬液与4mL培养基混合均匀，并在1000RPM条件下离心4分钟。弃去上清液后，加入1mL培养基并吹匀。最后，将所有细胞悬液移入含有5mL培养基的培养瓶中，在过夜的条件下进行培养。第二天需要更换培养基并检查细胞密度。
2. 细胞传代：当细胞密度达到80%-90%时，可以进行传代培养。对于悬浮细胞，可以按照以下方法进行传代：收集细胞，以1000RPM的速度在常温条件下离心5分钟，弃去上清液后，补加1-2mL培养液并吹匀。然后，将细胞悬液按照1：2到1：5的比例分配到新的含有8mL培养基的皿或瓶中。

应用^[1]

该方法可以用于观察苯并（a）芘（BaP）染毒对16HBE人支气管上皮细胞和上皮样肺成纤维细胞的细胞周期产生的剂量效应和时间效应。

参考文献

[1]苯并(a)芘染毒致人支气管上皮细胞和上皮样成纤维细胞周期的变化  陈文涛范燕峰张慧涛杨瑾山西医科大学公共卫生学院劳动卫生学教研室