MK-1775是一种有效的Wee1抑制剂吗? ¹

MK-1775，也称为AZD1775或Adavosertib，是一种小分子抑制剂，可以抑制酪氨酸激酶WEE1（IC50：5.2nM，在无细胞试验中）。它通过阻碍G2 DNA损伤检查点来发挥作用。MK-1775选择性地靶向并抑制WEE1，从而使细胞周期蛋白依赖性激酶1（CDK1，CDC2）磷酸化的复合物CDC2 /细胞周期蛋白B失活。它的化学中文名是2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2h)-酮。

那么MK-1775的生物活性是什么？如何进行实验呢？下面将详细说明。

首先我们介绍MK-1775的生物活性：

1）体外活性

MK-1775可以增强5-FU对p53缺陷型人结肠癌细胞的细胞毒作用。它抑制细胞中CDC2 Y15的磷酸化，消除由5-FU处理诱导的DNA损伤检查点，并通过诱导组蛋白H3磷酸化导致有丝分裂的过早进入。MK-1775可以消除p53缺陷细胞中辐射诱导的G2阻滞，但在p53野生型细胞系中没有这种效果。与吉西他滨治疗相比，吉西他滨与MK-1775的组合可以产生强大的抗肿瘤活性并显著增强肿瘤消退反应。

2）体内活性

在体内，MK-1775以可耐受的剂量增强5-FU或其前药卡培他滨的抗肿瘤功效。MK-1775可以增强异种移植肿瘤对分次放疗的反应。与仅使用GEM处理的小鼠相比，MK-1775可以使肿瘤生长退化。

接下来介绍如何进行MK-1775的活性实验：

1）细胞实验

使用含有50 mM HEPES（pH 7.9），0.4 mol / L NaCl和1 mM EDTA的裂解液从细胞沉淀中提取总蛋白，并用磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和NP-40进行处理。通过蛋白质测定法测定裂解物的蛋白质浓度。通过SDS-PAGE分离蛋白质并转移至膜上。使用特异性抗体进行免疫检测，然后使用化学发光显影技术来检测蛋白质信号。

2）动物实验

通过在小鼠腿部接种细胞形成肿瘤异种移植物。当肿瘤直径达到一定大小后，开始进行照射和MK-1775治疗。使用辐照器向荷瘤小鼠的肿瘤部位递送γ射线。每天两次照射肿瘤，并在照射前后给予MK-1775。

3）激酶实验

使用重组人Wee1进行体外激酶测定。在MK-1775存在下，使用ATP和底物进行激酶反应。将放射性掺入基质中，并在液体闪烁计数器上计数。

综上所述，MK-1775是一种有效的Wee1抑制剂，具有较低的IC50值。它的生物活性可以通过细胞实验、动物实验和激酶实验进行评估。

参考文献：

1. Hirai H, et al. MK-1775, a small molecule Wee1 inhibitor, enhances anti-tumor efficacy of various DNA-damaging agents, including 5-fluorouracil Cancer Biol Ther. 2010 Apr;9(7):514-22.

2. Bridges KA, et al. MK-1775, a novel Wee1 kinase inhibitor, radiosensitizes p53-defective human tumor cells. Clin Cancer Res. 2011 Sep 1;17(17):5638-48. Epub 2011 Jul 28.

3. Rajeshkumar NV, et al. MK-1775, a potent Wee1 inhibitor, synergizes with gemcitabine to achieve tumor regressions, selectively in p53-deficient pancreatic cancer xenografts.Clin Cancer Res. 2011 May 1;17(9):2799-806. Epub 2011 Mar 9.