提问
盖德化工网  >  盖德问答  >  如何使用试剂盒纯化D...

如何使用试剂盒纯化DNA? 1

0评论 +关注
共1个回答

试剂盒纯化DNA的方法非常简单,无需复杂的步骤。首先,将样品经过蛋白酶K消化处理,然后加入适合DNA结合的缓冲液,并将混合物加入纯化柱中。通过高速离心,DNA会在穿过纯化柱的瞬间结合到柱上,然后通过洗涤去除杂质,最后使用洗脱液将DNA洗脱下来。整个过程不需要使用酚氯仿抽提或酒精沉淀,非常方便快捷。

使用本试剂盒可以纯化得到长度最长可达50kb的基因组DNA,平均长度约为30kb。即使是长度为100bp的DNA也可以被成功纯化。如果需要更长的基因组DNA,可以考虑使用哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒。通过本试剂盒抽提得到的总DNA的OD260/OD280通常在1.7至1.9之间。

本试剂盒适用于抽提少至数百个细胞、多至25mg组织、0.5-1cm鼠尾、500万个培养细胞、20亿个细菌或5000万个酵母。需要注意的是,样品用量过多可能会影响抽提效果。如果待抽提样品的DNA含量小于5ng,建议加入适量的carrier DNA或carrier RNA来改善抽提效果。

本试剂盒的标准操作步骤可以得到含有少量RNA的总DNA。如果需要获得不含RNA的高纯度总DNA,可以选择加入RNase A。含有RNA的总DNA可以用于PCR,但对于某些后续反应可能会产生一些影响。

纯化柱对于DNA的最大容量约为30微克。根据不同样品的类型和量,每次抽提可以得到不同的总DNA产量。例如,每200万Hela细胞或500万淋巴细胞可以抽提得到15-25微克总DNA,每25mg肝、脑、肾组织可以抽提得到10-30微克总DNA,每25毫克心、肺组织可以抽提得到5-10微克总DNA,每10mg脾组织可以抽提得到5-30微克总DNA,每1.2cm小鼠尾尖或0.3cm大鼠尾尖可以获得10-25微克总DNA。

本试剂盒可以用于抽提50个样品的总DNA。包装清单包括样品裂解液A、样品裂解液B、洗涤液I、洗涤液II、洗脱液、蛋白酶K、DNA纯化柱及废液收集管,以及一份说明书。

试剂的保存条件为:蛋白酶K需在-20℃保存,其余试剂均可在室温保存,有效期为一年。注意事项包括抽提细菌、酵母样品时需要使用特定的试剂,样品裂解液A或样品裂解液B在低温下可能会产生沉淀,使用前需要检查并溶解沉淀。洗涤液I和洗涤液II在第一次使用前需添加无水乙醇并混匀,使用时需要在瓶上做好标记。使用本试剂盒时需要准备55℃水浴,并注意控制每次Vortex的时间在5-10秒左右。所有操作和离心均在室温进行,废液收集管需要在一次抽提中多次使用,切勿中途丢弃。

总之,本试剂盒提供了一种简便快捷的方法来纯化DNA,适用于各种样品类型和量。使用本试剂盒可以得到高质量的总DNA,为后续实验提供可靠的基础。

相关问题
柴油加氢裂化因焦化装置切塔时焦化柴油携带杂质导致过滤器冲洗? 0个回答
如何防止气化炉渣水处理开停车期间灰水管道垢片脱落? 0个回答
BGA、CSP封装中的球窝缺陷? 1个回答
锂电池涂布行业中,挤压模头使用的垫片厚度大家是怎么计算出来? 0个回答
多糖提取后,加乙醇沉淀产生絮状物,为什么离心后上层有絮状物? 0个回答
编辑推荐
三价铬溶液颜色问题? 15个回答
能否用离心代替旋蒸去除乙醇? 2个回答
想请教下靛蓝染料在紫外分光光度计下吸收的问题? 4个回答
硫酸钙结垢,用什么清洗掉? 4个回答
氰基取代苯环上的卤素的反应条件? 0个回答
 
请填写举报原因
选择举报原因
 
增加悬赏
剩余能量值
能量值