如何正确选择缓冲液？Tris、HEPES和PIPES及注意事项？

如何正确选择缓冲液Tris、HEPES和PIPES及注意事项

如何选择缓冲区

选择缓冲区时，重要的是要考虑每个缓冲区的优缺点。首先，您计划在实验中使用的试剂的pH范围必须与您选择的缓冲液的pH范围一致。其次，您必须考虑浓度，缓冲液毒性，温度和反应性。缓冲液的浓度必须足以说明您计划在实验中使用的酸或碱的量。您计划使用的pH改变成分越多，所需的缓冲液浓度就越高。缓冲液毒性非常重要，因为某些缓冲液可能会对正在使用的细胞产生毒性，因此，如果不确定毒性，可以在实验中使用缓冲液之前先对细胞进行测试。您还应确保决定使用的缓冲液不会在实验中产生不需要的反应。

Tris和Tris HCl溶液

Tris（三羟甲基氨基甲烷）可用于包括TAE和TBE在内的各种缓冲溶液中。例如用于SDS-PAGE。其有效pH范围是7.0至9.0。Tris缓冲液的两种常见形式是Tris碱和Tris HCl。调节Tris碱的pH值可能是一个挑战，但是使用Tris HCl而不是通过添加NaOH或HCl来调节pH可以简化此过程。使用Tris HCl替代NaOH或HCl的其他优点包括安全性和可重复性。

注意事项：

使用Tris溶液的一个技巧是溶液的pH值非常依赖于温度。因此，应在使用缓冲液的温度下制备Tris。此外，应避免使用含Tris缓冲液的含银单结pH电极。

HEPES缓冲液

HEPES是两性离子Good's缓冲液，在6.8至8.2的pH范围内有效。这使HEPES在生理pH值下成为有效的缓冲液。该缓冲液可用于多种生物的细胞培养基中。它也可用作蛋白质研究中的结合缓冲液，用于阳离子交换洗脱实验中，以及在凝胶电泳中用作运行缓冲液。

注意事项：

HEPES可溶于水，并且通常具有生物惰性。然而，它确实参与了产生自由基的氧化还原反应，并干扰了DNA与限制酶之间的反应，但是由于空间位阻，其干扰程度小于Tris。同样重要的是要注意，当使用异质连接蛋白通道时，不应使用HEPES，因为它会抑制其功能。如果要进行毒性研究，请选择HEPES钠盐而不是游离酸。

PIPES缓冲液

PIPES是哌嗪缓冲液家族的一员，与HEPES属于同一家族。它是两性离子Good's缓冲液，在6.1至7.5的pH范围内有效。由于pH范围与HEPES略有不同，PIPES的浓度仅为HEPES浓度的一半。该缓冲剂不会与金属络合，因此可用于含金属离子的溶液。它也可以用于色谱分析，电子显微镜固定植物细胞，以及代替草甘膦缓冲液。

注意事项：

直到溶液的pH值升高到6.5以上时，PIPES的游离酸才容易溶解，但是PIPES的钠盐很容易溶解。如果使用的是游离酸形式的缓冲液，请使用氢氧化钠将其转化为钠盐，以提高在较低pH下的溶解度。像HEPES一样，PIPES不适用于涉及氧化还原反应的实验，因为它会导致自由基的形成。