本人做一条合成18肽新药的药代动,分子量2130Da,使用HPLC内标法进样分析(条件有限用不上串联质谱),现在在血浆样品预处理过程卡住了,使用过几个方案处理血浆样品测回收率,都是乙腈沉淀,结合氯仿或二氯
甲烷反提的方法,但是目标药物基本不出峰,考虑是不是药品和
血浆蛋白都被乙腈沉淀掉了?但是看文献中处理血浆蛋白干扰大多数都是用沉淀法,急求做过多肽药物的高人指点,推荐一些可行的血浆样品提取方案。这周末希望能制定新的方案,下周继续跑样品!
甲醇沉淀也试过,但检测波长是220nm,甲醇有干扰后来就不用了。
①200μl空白血浆,加入药品(A6)与IS各50μl,300μl乙腈沉淀,涡旋1min,15000rpm离心10min,小心提取上清液,加入600μl二氯甲烷,(提取后加药的样品此时加入A6与IS,空白血浆提取之前不加药),涡旋1min,15000rpm离心10min,提取上层水层进样20ul。
②200μl空白血浆,加入300μl乙腈沉淀,涡旋1min,15000rpm离心10min,小心提取上清液,加入600μl二氯甲烷,此时加入A6与IS各50μl,涡旋1min,15000rpm离心10min,提取上层水层进样20ul。
A6在15.5min出峰,IS在20.5min出峰,但是血浆样品中并没有。14min有一特别大的血浆蛋白的峰,一直除不掉。