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LH-20装柱时产生很多气泡该怎么处理?

打算用LH-20分离硅胶柱中用氯仿冲下来的一个东西,TLC用正己烷-二氯甲烷(7:3)点板有三个斑点,分离的还行。上凝胶柱时也就用这个比例。凝胶之前是用甲醇浸泡的,将凝胶真空抽滤后我用正己烷-二氯甲烷(7:3)的溶剂又溶涨了三天,时时搅拌,令其充分溶涨,但上柱时依然出现很多气泡,我的洗脱液就用等度,没走梯度。而且凝胶还有粘壁现象,不容易冲洗,不知是什么原因,是什么地方操作不正确吗?


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共4个回答
凝胶柱在分离过程中不存在梯度的问题,只要恒梯度就可以了。凝胶柱是分子筛原理,同时也有部分的吸附作用,因此换梯度一般不会起到很好的作用。一般用凝胶柱分离小极性的物质,体系一般为(氯仿:甲醇=1:1),而对于相对较大极性的一般用(甲醇或者甲醇:水体系)。 灌柱一定要小心,这个直接影响到你的柱校的,首先在柱子里边加入适当溶液(个人经验加到柱长的2/3吧),然后将脱好气的填料用个吸管沿柱子边慢慢加入,下边可以打开让溶液慢慢流出,这样知道整个柱子装好(注意中间不要等填料沉实时再加填料,那样会出现断层)。
我们的葡聚糖凝胶一般都用小柱子,浸泡后直接装柱,没有脱气,也没有见到气泡。葡聚糖凝胶的沉降很慢,因此装柱的时候要预先加入一些溶剂,慢慢用滴管转移,柱子装好是分离成功的一半。
首先你得知道凝胶柱和硅胶柱有着本质的区别,适应于硅胶柱的条件对于凝胶来说不一定合适,所以你用正己烷-二氯甲烷(7:3)来过凝胶柱就不一定合适,至少我没有见过和听说过用这样的系统来进行凝胶洗脱的。凝胶柱灌柱之前最好要脱气,这样含有的气体才会少,只是静止明显是不够的。
凝胶柱上样的时候一定要充分溶解,因此所选用的系统也对药品要很好的溶解性,否则不但影响效果,还会浪费样品损坏柱子。上好样后,流速一定不要太快,否则就不会很好的起到分子筛的作用。
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