求助大家!!!我目前在克隆启动子,好不容易P出了2600bp左右的条带,回收之后构建到PBI121和PAbAi载体上,
重复做了不少于20次,都能长出菌斑,但是鉴定都没有阳性克隆。我检查了回收的片段产物,酶切产物都没有问题,也试过了不同的比例(片段产物/酶切产物),但还是没有用。但这是我的毕业课题,也不能一直拖着吧,然后找生物公司帮忙做,他们看了我的序列说是靠近CDS区域的序列AT含量太高,GC含量低,并且是构建到低拷贝载体上,不容易做,但他们做了半个月了,也没啥动静,简直是急死我了。。。。。现在不知道要咋办了,所以请大家帮我看一下,有什么办法解决没有。不胜感激!!!