磷酸化蛋白酶常用的蛋白酶抑制剂包括:PMSF(1mmol/l)、aprotinin(1ug/ml)、pepstatin A(1ug/ml)、leupeptin(1ug/ml)、orthovanadate, beta-glycerophosphate,imidazole,sodium fluoride,molybdate,tartrate dihydrate, and so on.其中最常用的当属前面3种。应该注意的问题:1 保证蛋白的新鲜:1>如果是组织的,组织离体后应当立即放到液氮中保存,长期保存的话最好也在液氮中(如果条件不允许则放置-80度)。2>提取蛋白时采用液氮研磨的方法。3>避免蛋白的反复冻融,尽可能分装保存。2 蛋白酶抑制剂:各家应用的蛋白酶抑制剂的量和裂解液的配方不一,但是大都是上述几种抑制剂的混合物。如果条件好的化可以购买蛋白酶抑制剂cocktail (Calbiochem有专门的蛋白酶抑制剂Cocktail (组织的用II+III;细胞的用I+II)