酸性L-G培养基的应用及其在结核分枝杆菌耐药性研究中的价值？ ¹

背景^[1-3]

酸性L-G培养基是一种用于培养分枝杆菌标本的培养基，特别适用于碱性物质处理后的培养。

该培养基的成分包括磷酸二氢钾、硫酸镁、柠檬酸镁、L-谷氨酸钠、孔雀绿和马铃薯淀粉。

制备方法：将52.44g的酸性L-G培养基称取并加入12ml甘油，加热搅拌溶解于600ml蒸馏水中，煮沸5-10分钟后在121℃高压灭菌15分钟。待冷至55℃左右时，加入无菌搅匀的全蛋液1000ml，混匀后分装到试管中，每管7ml，置成长斜面，用85-90℃流动蒸汽处理1-1.5小时后，取出放冷备用。

结核分枝杆菌（M.tuberculosis）是引起人类结核病的病原体。该菌为细长略带弯曲的杆菌，大小约为1～4X0.4μm。牛分枝杆菌则比较粗短。分枝杆菌的细菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60%，大量分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面，可影响染料的穿入。分枝杆菌一般用齐尼抗酸染色法进行染色，但用3%盐酸乙醇不易脱色。本菌无芽孢、无鞭毛。

培养特性：结核分枝杆菌为专性需氧菌，最适生长温度为37℃，低于30℃不生长。由于细菌细胞壁的脂质含量较高，影响营养物质的吸收，故生长较为缓慢。在含氧40%~50%、5%~10%CO2和36℃±5℃的条件下，结核菌生长旺盛。在营养丰富的培养基中，每分裂1代需时18～24小时，而在特定条件下只需5小时。

应用^[4][5]

酸性L-G培养基在PhaB法检测结核分枝杆菌利福平耐药性及其耐药基因突变研究中的价值

本研究旨在探讨和评价酸性L-G培养基在结核分枝杆菌利福平耐药性研究中的应用价值，同时对结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB的突变进行研究，为进一步研究利福平耐药机制提供实验基础。

方法：使用抗酸染色法和酸性L-J培养基培养法检测临床痰标本中的结核分枝杆菌，并对分离出来的菌株进行菌型鉴定，获得结核分枝杆菌临床分离株。

采用绝对浓度法对结核分枝杆菌临床分离株进行利福平耐药性检测，筛选出对利福平耐药的临床分离株。

应用PhaB法对108例结核分枝杆菌临床分离株进行利福平耐药性的测定，并将结果与常规绝对浓度法进行比较，评价PhaB法的应用价值。此外，对结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB进行PCR扩增后进行测序，研究其突变情况。

结果：对108株结核分枝杆菌临床分离株进行利福平耐药性测定，常规绝对浓度法检测结果显示敏感26株，耐药82株；PhaB法检测结果显示敏感24株，耐药84株，与绝对浓度法结果符合率为92.59%。以绝对浓度法结果为评判标准，PhaB法的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为96.34%、77.78%、94.05%、87.50%和92.59%。

参考文献

[1]In Vitro Activity of Fluoroquinolones against Mycobacterium tuberculosis[J].Sulochana,Rahman,Paramasivan.Journal of Chemotherapy.2005(2)

[2]Genetic Susceptibility to Tuberculosis[J].Suneil Malik,Erwin Schurr.Clinical Chemistry and Laboratory Medicine.2002(9)

[3]Identification of Brucella melitensis vaccine strain Rev.1 by PCR-RFLP based on a mutation in the rpsL gene[J].Axel Cloeckaert,Maggy Grayon,Olivier Grépinet.Vaccine.2002(19)

[4]Variations in DNA concentrations significantly affect the reproducibility of RAPD fingerprint patterns[J].A Davin-Regli,Y Abed,R.N Charrel,C Bollet,P de Micco.Research in Microbiology.1995(7)

[5]赛文莉.PhaB法检测MTB利福平耐药性及其耐药基因突变[D].安徽理工大学,2008.