本试剂盒采用硅基质膜技术，通过简单的结合-洗涤-洗脱三步骤，能够从多种酶促反应液中纯化回收核苷酸链和DNA片段。该试剂盒适用于从去磷酸化、限制性内切酶酶切、连接、末端标记等反应产物中回收17-40mers的寡核苷酸片段。纯化过程能够去除10bp以下的寡核苷酸、盐和其他杂质，从而获得高纯度、完整性好、浓度高的DNA片段。纯化后的DNA片段可用于芯片分析、放射性和荧光测序、连接和转化、限制性酶酶切、标记、显微注射、PCR和体外转录等应用。
1. 本实验需要准备无水乙醇和离心管。
2. 本试剂盒可以无选择性地回收溶液中的所有DNA片段（可去除小于10bp的小片段），如果需要选择性回收特定片段并去除其他不同大小的片段，请选择胶回收试剂盒。
3. 使用前请检查Buffer1#是否出现结晶或沉淀，如果有，请在37℃水浴中加热几分钟以恢复澄清状态。
4. 第一次使用前，请按照试剂瓶标签的说明在Buffer3#中加入无水乙醇。
5. 回收率受初始DNA量和洗脱体积的影响。
6. 所有离心步骤均在室温下使用台式离心机进行。
1. 估计DNA反应液的体积，如果回收片段小于100bp，加入10倍体积的Buffer1#（例如PCR反应体系为50µl，则加入500µlBuffer1#）；如果回收片段大于等于100bp，则只需要加入5倍体积的Buffer1#（例如PCR反应体系为50µl，则加入250µlBuffer1#）。
2. 柱平衡：向已吸附柱中（吸附柱应预先装入收集管中）加入200μlBuffer2#，以12,000rpm（~13,400×g）离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
3. 将步骤1中得到的溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置2分钟，以12,000rpm离心1分钟。
注意：吸附柱容积为700µl，若样品体积大于700µl，可分批加入。
4. 离心后，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：对于含有放射性的样品，离心后，将装有废液的收集管弃掉，将吸附柱放入一个新的收集管中。
5. 向吸附柱中加入600µlBuffer3#（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），以12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：对于含有放射性的样品，向吸附柱中加入450µlBuffer3#（请先检查是否已加入无水乙醇），以12,000rpm离心1分钟。将废液弃掉，将吸附柱重新放回收集管中，重复操作一次。
6. 以12,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱放置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。
7. 将吸附柱放入一个新的离心管（自备），向吸附膜中间位置悬空滴加100-200µlBuffer4#，室温放置2分钟，以12,000rpm离心1分钟，收集DNA溶液。将DNA溶液保存在-20℃。
1. 洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响。若使用水作为洗脱液，应确保其pH值在7.0-8.5范围内（可以用NaOH将水的pH值调整到此范围）。
2. 为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回吸附柱中，重复步骤7。
3. 洗脱体积不应小于100μl，体积过少会影响回收效率。
4. 如果使用TE洗脱，应考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促反应。
5. 回收大于10kb的DNA片段时，应在50℃水浴中预热Buffer4#，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。
主要参考资料
[1]寡核苷酸纯化试剂盒产品说明书
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