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如何使用蛋白质抽提试剂提取细胞总蛋白? 1

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蛋白亦称蛋清、卵白。禽类。禽蛋的一部分。禽蛋壳膜里一层很厚的白色半透明的黏性半流动体。其接近蛋黄的部分比较浓稠,接近蛋壳的部分稀薄;新鲜蛋的蛋白较浓稠,反之蛋白稀薄。蛋白呈碱性,加热后呈固形物。每100g含水分84.4g、蛋白质11.6g、维生素B20.31mg、钾132mg。培养细胞总蛋白提取试剂温和,为防止在样品处理过程中的人为因素造成的蛋白质降解,培养细胞总蛋白提取试剂制备过程应在低温下进行,建议加合适的蛋白酶抑制剂,使用前数分钟内加入PMSF,PMSF的工作浓度为1mM。常见抑制剂包含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,但因抑制剂在提取试剂中不稳定,需使用前加入。

使用方法

1、从贴壁细胞培养瓶中小心倾去培养液。

2、预冷的PBS清洗贴壁的细胞2次,小心倾去PBS。

3、配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂(1ml抽提试剂中加入5µl蛋白酶抑制剂混合液,5µlPMSF和5µl磷酸酶混合液)。

4、细胞瓶中加入预冷的含抑制剂的蛋白质抽提试剂(107个细胞中加入1ml抽提试剂;5×106个细胞中加入0.5ml抽提试剂),轻轻摇动5分钟。

5、用一预冷的橡胶和塑料细胞刮将培养瓶壁上贴壁细胞刮下来,转移细胞悬浮液到离心管中,冰浴下摇动15分钟进行裂解。

6、裂解液于预冷的离心机中14,000xg离心15分钟。弃去沉淀,上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。

裂解液用量说明:用于不同规格标准培养板裂解液用量

主要参考资料

[1] 营养科学词典

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