如何分离和培养人气管上皮细胞? ¹

上皮细胞是覆盖身体表面和体内空腔器官腔面的细胞，具有明显的极性。它们在保护、吸收、分泌和排泄等方面发挥着重要作用。人气管上皮细胞是气道与外界环境接触的第一道防线，对气道炎症和免疫反应起着重要作用。因此，分离和培养人气管上皮细胞对于基础和临床研究非常重要。

分离和培养方法

首先，将获取的气管组织保存在低温PBS溶液中，并用无菌PBS进行冲洗。然后，将组织切成碎片，置于含有蛋白酶XⅣ的PBS中，在4℃下消化12-24小时。消化后，使用10% FBS终止消化，并通过离心将上皮细胞分离出来。将分离的细胞重悬于BEGM培养液中，转移到培养皿中，并在37℃下孵育1小时。使用差速贴壁法除去先贴壁的成纤维细胞后，再收集上皮细胞，并调整密度后接种于胶原包被的培养皿中。在37℃，5%CO2条件下进行培养，并每天更换培养基。

ALI培养方法

在分离和培养的基础上，将上皮细胞用胰酶消化后，重悬于BEGM中，并接种于预铺人Ⅳ型胎盘胶原的Transwell支持膜上。同时，在膜下层也加入培养液BEGM，并在37℃，5%CO2培养箱中进行培养。当细胞达到80%-90%的融合时，移除支持膜上层的培养基，并只在膜下层加入ALI培养基进行培养。每天更换培养基，并在37℃，5%CO2培养箱中培养4-6周，观察记录细胞的生长和分化状况。

显微镜观察

使用光镜观察原代和ALI培养细胞的生长状况，使用电镜观察原代细胞的纤毛结构。观察结果显示，经过分离和培养后的上皮细胞生长良好，细胞数量逐渐增多。与对照组的成纤维细胞相比，分离的细胞形态符合上皮细胞的特征。

主要参考资料

[1] 儿科学辞典

[2] 人气管上皮细胞的原代分离及气液界面培养