背景中的人肝母细胞瘤细胞是什么类型的细胞? ¹

HUH-6人肝母细胞瘤细胞是一种上皮细胞样贴壁细胞肝癌细胞，具有产球蛋白和甲胎蛋白的特性。这些细胞在DMEM＋10%FBS＋1%P/S的生长培养基中培养，气相为空气95%和CO25%，温度为37℃。

HUH-6人肝母细胞瘤细胞是一种特殊的细胞。

如何进行细胞复苏操作？

1）将培养基在37℃水浴锅预热，然后准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）从液氮罐中取出冻存细胞，迅速放入37℃水浴锅中复温。可以使用一个洁净的烧杯装满37℃的水，将细胞冻存管放入烧杯中，然后逐步转移到水浴锅中。在1~2分钟内轻轻晃动冻存管，使细胞完全解冻，避免在-5~0℃的温度段对细胞造成损伤。注意不要让冻存管的管口浸入水中，以避免污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后，将其置于超净台内。将管内的细胞转移到准备好的离心管中，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散并降低DMSO浓度。在吹打时要避免产生气泡。然后用新鲜培养基洗涤管壁两次，将洗涤液转移到离心管中。

4）以800rpm离心5分钟，弃去上清液，加入新鲜的培养基，再次吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移到T25细胞瓶中，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞均匀分布，并放入温箱中进行培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，直到细胞达到80~90%的汇合。

人肝母细胞瘤细胞在哪些方面有应用价值？

PI3K-Akt信号通路在肝母细胞瘤的作用及肝母细胞瘤预后危险因素的评估研究

通过差异基因表达筛查发现，肝母细胞瘤组织中PI3K-Akt通路的相关因子，如PI3K、Akt、PKC、PKB和GSK-3等，具有特异性高表达。

利用MTT法测定LY294002对肝母细胞瘤细胞系HuH-6和HepG2的增殖影响；通过Western blot分析PI3K通路抑制剂LY294002对肝母细胞瘤细胞系中PI3K和Akt表达的影响；通过RT-PCR检测PI3KmRNA在肿瘤和癌旁组织的表达差异；通过Western blot检测PI3K、p-Akt（Ser473）和总Akt蛋白在肿瘤和癌旁组织的差异。

研究结果显示，HuH-6和HepG2细胞对不同浓度的PI3K抑制剂LY294002处理具有剂量依赖性的增殖抑制作用；随着LY294002浓度的增加，HuH-6和HepG2细胞中PI3K和p-Akt（Ser473）蛋白的表达逐渐下降，并且各组之间存在统计学差异（p<0.001）；肿瘤组织中PI3K mRNA的表达显著高于癌旁组织；肿瘤组织中PI3K和p-Akt（Ser473）蛋白的表达显著高于癌旁组织。而总的Akt和β-actin在两组病人中没有显著差别。

综上所述，PI3K-Akt通路的激活在肝母细胞瘤的发生和发展中起到重要作用，相关基因在肿瘤组织中的表达显著高于癌旁组织，提示该通路可能是肝母细胞瘤的潜在治疗靶点。

参考文献

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