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质粒大提,除蛋白离心后上清还是很浑浊,过柱子堵塞?

大提质粒后加入NEU-buffer离心后只有少量蛋白沉淀,上清还是很浑浊,之后过柱子一直堵塞,质粒提取效率很低。
怀疑是菌过多,第二次提的时候多加了一倍的RES-buffer和LYS-buffer裂解,但是结果还是一样
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123液后是高速离心吗?加二液后混匀充分了吗?时间有3分钟吗?
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