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请教消化时添加的EDTA需要可以去除吗?

消化小鼠MSC,原本根据朋友赠与的超代细胞(10代以后,导师认为已经癌变,不适合实验,只能用于摸索培养、消化的条件)单纯使用胰酶即可消化,消化之后终止、离心、重悬后植入,状态还可以,贴壁率很高
但是后来自己养原代的时候发现其实挺难消化的,根据文献的建议加入一点点的EDTA(0.2%)但是出来个问题:消化下来的细胞按照原来的终止、离心、重悬等步骤之后,漂浮在培养液上面,连续几次都是,有时候甚至可以在培养瓶外面都看得出来(絮状漂浮物),自然也就无法贴壁并且生长
发生这种情况是不是EDTA没有残留,导致新的完全培养液里面的钙缺乏所以无法贴壁?如果是的话应该如何处理?是否应该在培养液里面再适当加入一点钙离子进行补充?


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共1个回答
小鼠骨髓MSC原代本来就不太好样,应该不是添加EDTA的问题,而可能是你消化过了,影响了MSC状态。原代MSC有很多杂细胞,特别是小鼠骨髓,消化的时候不需要等到所有细胞全部消化下来再终止消化,那时基本就消化过了。那些消化不下来的细胞大都不是MSC(如果你的培养基不是很好的话,有可能原代里面,大部分消化不下来也是可能出现的),所以你只要按照正常消化细胞流程走就可以,把比较容易消化下来的细胞收集到,传代试试。
如果方便的话可以说说你用的什么培养基,培养基对MSC还是挺重要的。
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