拟定进行分化研究是否要将ESC消化成单个细胞再进行培养?

拟胚体作为哺乳动物胚胎发育研究的体外模型，近年来已引起研究者的广泛关注，从均一细胞组成的简单拟胚体到胚层分化完整的囊状拟胚体过程，许多形态特征和分化机制重演了体内桑椹胚到原肠胚的发育过程。Electra Coucouvanis 等通过BMP（bone morphogenetic protein）突变体的研究，发现外胚层细胞分泌的BMP信号在脏壁内胚层的分化过程中起着重要的作用。Sandy Becker 等对F9细胞形成拟胚体的原位杂交发现，Indian hedgehog在成熟拟胚体外层的内胚层细胞表达明显升高，而内部的细胞表达量较低；拟胚体经过Hh 拮抗剂cAMP and forskolin的处理后，Hh表达量明显降低，同时外层的原始内胚层细胞开始向腔壁内胚层转变，因此Hh信号可能也参与了拟胚体原始内胚层的分化过程。对于拟胚体外胚层的形成，Xiaofeng Li等用FGFR2突变细胞进行研究，结果发现，这种拟胚体未出现内胚层、外胚层、基膜及空腔等典型结构，进一步的研究表明，已分化出的内胚层细胞可以通过分泌的FGFs对柱状外胚层的分化进行调控。值得注意的是，在拟胚体分化过程中，内胚层细胞可以通过分泌的细胞外基质形成类似Reichert膜的基膜结构，其主要成分是胶原、层粘连蛋白等，这种基膜在一定程度上也参与了外胚层分化的调控。拟胚体空腔的形成对于研究，目前多倾向于细胞凋亡学说，但引起凋亡的原因尚不清楚，有人通过tunel标记和电镜观察证实了这一假说，Nicholas Joza等还发现一条caspases非依赖的apoptosis-inducing factor (AIF) 引起的凋亡参与了拟胚体空腔形成的过程。还有人通过标记？发现，凋亡的细胞碎片被外胚层细胞吞噬，从而形成空腔。

单个细胞悬液可以重新聚集,应该是单细胞悬液.但是我有时也会有细胞团快