pcr 重复不稳定，同样的操作方法有的好有的差？

pcr 重复不稳定，同样的操作方法同一个样本，重复孔有的好有的差，10ul体系我是先加2ul引物，然后加5ulmaster mix,再加1ul模板，最后加2ul 水，很细心的加，但重复就是不好，操作可能有问题，引物不会少，buffer顶多差0.3ul以内，因为容易产生泡沫，样本浓度高，我都是向壁上加，但是实在不知道差在哪里？