胎牛血清是一种在妊娠后期剖腹取出的血清,具有丰富的营养成分和极低的代谢产物,同时微生物感染的风险也很小。因此,胎牛血清成为细胞培养和病毒增殖过程中重要的营养来源。在细胞培养中,通常会添加5%-20%的胎牛血清(澳洲),其中10%的浓度是最常用的。然而,高浓度的血清可能会影响细胞的基因表达谱,从而对实验结果产生影响。因此,在培养293T细胞时,使用10%的澳洲胎牛血清效果最佳。当然,对于其他细胞,可以根据具体情况选择合适的胎牛血清浓度。
1、长期保存的澳洲牛血清,如澳洲南美胎牛血清,应储存在-20℃至-70℃的低温冰箱中。在4℃冰箱中保存的时间不应超过1个月。同时,避免将血清长时间放置在37℃,否则血清会变浑浊,有效成分也会受到破坏,从而影响血清的质量。如果一瓶血清无法一次使用完毕,可以将40~45ml的血清分装到无菌的50ml离心管中。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此在冷冻之前,必须预留一定的空间,以避免污染或玻璃瓶破裂的风险。
2、一般厂商提供的血清已经是无菌的,无需再进行过滤除菌处理。如果发现澳洲牛血清中有悬浮物,例如澳洲北美胎牛血清,可以将血清加入培养液中一起过滤,但切勿直接过滤血清。
3、解冻澳洲胎牛血清时,应采用逐步解冻的方法。首先将-20℃至-70℃低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天,然后将其移至室温,待完全溶解后再进行分装。一般来说,可以将血清分装到50ml无菌离心管中,每管分装40~45ml。在溶解过程中,需要定期均匀地摇晃(小心避免产生气泡),以使温度和成分均匀,减少沉淀的产生。切勿直接将血清从-20℃放入37℃解冻,因为温度变化过大会导致蛋白质凝聚和沉淀的产生。
4、热灭活是指将完全解冻的血清加热至56℃,持续30分钟。在加热过程中,需要定期均匀地摇晃。热灭活的目的是灭活血清中的补体成分。一般情况下,不建议进行热灭活处理,因为这会导致血清中沉淀物显著增多,并且会影响血清的质量。补体参与的反应包括细胞毒作用、平滑肌细胞收缩、肥大细胞和血小板释放组织、增强吞噬作用以及促进淋巴细胞和巨噬细胞的化学趋化和活化。
5、血清中的沉淀物和絮状物主要是由血清中的脂蛋白变性和解冻后的纤维蛋白引起的。这些絮状物不会影响血清本身的质量。可以通过离心(3000rpm,5分钟)去除沉淀物,也可以不进行处理。热处理后的血清中可能会出现显微镜下的“小黑点”,这是由于沉淀物显著增多所致。虽然这些小黑点通常不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量存在问题,应立即停止使用,并更换另一批号的血清。
[1]农业大词典
[2]南美胎牛血清使用说明