微丝是一种由肌动蛋白组成的纤维状细胞器,直径约为5~8nm。它可以以束状或散在分布的形式存在。微丝是一种动态结构,在适宜条件下,肌动蛋白单体可以组装成丝状的微丝结构。微丝由两条丝状肌动蛋白缠绕而成,形成双螺旋结构。微丝在细胞中起到维持细胞形状和结构稳定性的作用,同时也参与细胞的运动。然而,微丝单独存在时无法收缩,需要与收缩蛋白,尤其是肌球蛋白一起作用才能实现收缩功能。
在非肌肉细胞中,微丝可以推动细胞质流动,参与细胞的变形运动,以及胞吞和胞饮等过程。在肌肉细胞中,微丝与粗肌丝一起构成细肌丝,实现肌肉细胞的收缩功能。此外,微丝还可以引起微绒毛的伸缩和摆动。
1、取材:用去离子水稀释PBS缓冲液(*10)至1倍浓度。轻轻撕取约1厘米洋葱鳞茎内皮,孵育,使其下沉。
2、抽提:弃掉PBS缓冲液,加入TM缓冲液,盖上称量瓶盖子,在37℃处理。
3、漂洗:弃掉TM缓冲液,用去离子水稀释M缓冲液(3倍)至1倍浓度,用1倍M缓冲液清洗。
4、固定:稍微晾干,加入Microfilamentfluid固定细胞。
5、冲洗:弃掉Microfilamentfluid,用1倍M缓冲液清洗。
6、染色:弃掉PBS缓冲液,将盖玻片立于吸水滤纸上吸去边缘水分,加入R250染色溶液。
7、用去离子水冲洗染液,将标本铺在载玻片上,加盖玻片,进行镜检。
在染色过程中,应缓慢加入试剂到称量瓶中,避免直接滴到玻片或样本上。清洗细胞时要轻柔,避免细胞脱落。
[1] 兽医大辞典
[2] 微丝染色液(R250法)操作说明