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什么是Anti-c-Myc tag抗体(HRP)? 1

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Anti-c-Myc tag抗体(HRP)是一种多克隆抗体,可以特异性结合c-Myc tag。它主要用于多种免疫学实验,如Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等。

它的检测原理是通过双抗体夹心法来测定标本中c-Myc tag的水平。首先,将纯化的c-Myc tag抗体包被在微孔板上,形成固相抗体。然后,依次加入c-Myc tag和HRP标记的c-Myc tag抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后,加入底物TMB进行显色。根据颜色的深浅和样品中c-Myc tag的含量,可以通过酶标仪测定吸光度来计算c-Myc tag的浓度。

除了Anti-c-Myc tag抗体(HRP),还有其他标签蛋白抗体,如MyC、His、GST、HA等。这些标签抗体经过亲和纯化,可以用于检测标签序列在商品化表达载体上的表达含量和功能。标签抗体在基因蛋白表达、信号转导和基因功能研究中是常用的工具。

c-MycTag多肽是一种合成的多肽,它的氨基酸序列相当于人c-Myc蛋白C-末端的410-419序列。c-Myc Tag多肽可以与anti-c-Myc抗体竞争性结合,是一种温和的试剂,可用于洗脱与anti-Myc单抗结合的Myc-tag融合蛋白。

Anti-c-Myc tag抗体(HRP)的应用

用于周期蛋白G2结合蛋白的筛选及初步功能研究

周期蛋白G2是由CCNG2基因编码的蛋白,它在细胞中主要分布于细胞质。周期蛋白G2的表达水平随细胞周期波动,在晚S期最高,在G2/M期开始降低。

研究发现,周期蛋白G2的瞬时表达可以导致细胞在G1期停滞,这与周期蛋白G2-蛋白磷酸酶2A复合物的作用有关。

通过构建周期蛋白G2与GAL4-BD的融合蛋白表达载体,应用MATCHMAKER GAL4 Two-Hybrid System 3,可以筛选与周期蛋白G2结合的蛋白。研究发现,PPP2R5B是已知与周期蛋白G2结合的PP2A的B56β亚基。

此外,还发现了其他与周期蛋白G2结合的蛋白,如DAPPER1、BPY2IP1和Clorfl87。

为了验证这些蛋白与周期蛋白G2的结合,可以构建真核表达载体,并通过Western Blot检测它们与周期蛋白G2的结合。

参考文献

[1] Kamibayashi, C., Serrano, M., Prives, C., Mumby, M. C., & Beach, D. (1996). p53-dependent association between cyclin G and the B'subunit of protein phosphatase 2A. Molecular and Cellular Biology.

[2] Craig, E. A. (1996). Genomic libraries and a host strain designed for highly efficient two-hybrid selection in yeast. Genetics.

[3] Burgess, W. H., Miki, T., Bottaro, D. P., Kraus, M. H., & Aaronson, S. A. (1999). Isolation and biochemical characterization of the human Dkk-1 homologue, a novel inhibitor of mammalian Wnt signaling. Journal of Biological Chemistry.

[4] Zolnierowicz, S., & Hemmings, B. A. (1999). Regulation of protein kinase cascades by protein phosphatase 2A. Trends in Biochemical Sciences.

[5] 于敏. 周期蛋白G2结合蛋白的筛选及初步功能研究[D]. 中国协和医科大学, 2005.

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