辣根过氧化物酶标记羊抗大鼠IGG的应用及其免疫活性研究？ ¹

背景^[1-3]

辣根过氧化物酶标记羊抗大鼠IGG是一种特异性结合大鼠IGG的抗体，它是以大鼠IGG为抗原，通过羊为宿主制备而成。过氧化物酶是一种常用的酶，通常从辣根中提取得到，被广泛应用于临床检验试剂和免疫类试剂盒中。作为多个试剂盒显色体系的关键成分，过氧化物酶对试剂盒的质量具有重要影响。

免疫球蛋白G(IgG)是一种在人体中含量最高的免疫球蛋白，主要分布在血清和组织液中，是抗细菌、抗毒素和抗病毒抗体的主要组成部分。IgG不仅是人体免疫反应的重要物质基础，也是唯一能通过胎盘屏障的免疫球蛋白，对新生儿抗感染起重要作用。

IgG抗体在免疫应答中起着激活补体和中和多种毒素的作用。它具有长时间的持续性，是唯一能在母亲妊娠期穿过胎盘保护胎儿的抗体。此外，IgG还通过乳腺分泌进入初乳，使新生儿在出生后第一时间得到抗体保护。

IgG是四链单体，占血清Ig总量的75%，是血清和细胞外液中最主要的抗体成分。根据其在血清中浓度的高低，人体IgG可分为四个亚类，分别为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。IgG主要由脾脏和淋巴结中的浆细胞产生，具有重要的免疫效应，是机体抗感染的主要抗体。

应用^[4][5]

生物素化AcMNPV基于VSV-G跨膜结构域表面展示PEDV S1及其免疫大鼠活性研究

本研究通过构建生物素化重组杆状病毒来展示PEDV的主要抗原特征性蛋白S1，并利用生物素-链霉亲和素系统的高亲和力结合特点，简单高效地纯化杆状病毒。进一步，以该病毒作为疫苗免疫怀孕大鼠，通过检测大鼠产生的S1特异性IgG和乳汁sIgA评价其免疫活性。

研究中分别克隆了经修饰的PEDV S1基因、生物素连接酶基因(BrA)以及融合生物素受体肽序列(BAP)的杆状病毒基因gp64。利用Bac-to-Bac系统和线性化同源重组以及非同源末端连接构建了重组杆状病毒。通过Western blot、直接荧光、间接免疫荧光和免疫电镜等方法分析了S1蛋白在细胞中或病毒表面的表达和定位。利用链霉亲和素磁珠纯化生物素化重组杆状病毒，并通过Western blot、银染以及荧光定量PCR等方法分析了重组病毒的纯化效果。

研究还以磁珠法纯化的重组杆状病毒以及野生型PEDV和杆状病毒Ac-WT、生理盐水(Saline)作为免疫原，皮下免疫怀孕SD大鼠。通过ELISA方法检测孕鼠血清中S1特异性IgG、乳汁S1特异性sIgA以及大鼠乳汁总sIgA的含量，分析了重组杆状病毒的免疫原性。

参考文献

[1]The S2 glycoprotein subunit of porcine epidemic diarrhea virus contains immunodominant neutralizing epitopes[J].Faten A.Okda,Steven Lawson,Aaron Singrey,Julie Nelson,Kyle S.Hain,Lok R.Joshi,Jane Christopher-Hennings,Eric A.Nelson,Diego G.Diel.Virology.2017

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[4]Molecular characterization and phylogenetic analysis of porcine epidemic diarrhea virus(PEDV)field strains in south China[J].Zhi-Li Li,Ling Zhu,Jing-Yun Ma,Qing-Feng Zhou,Yan-Hua Song,Bao-Li Sun,Rui-Ai Chen,Qing-Mei Xie,Ying-Zuo Bee.Virus Genes.2012(1)

[5]刘轶轩.生物素化AcMNPV基于VSV-G跨膜结构域表面展示PEDV S1及其免疫大鼠活性研究[D].浙江理工大学,2019.