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什么是Bak基因及其在细胞凋亡中的作用? 1

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Bak基因是一种新发现的bcl-2家族的同源类似物,具有211个氨基酸,能够促进细胞死亡,并对抗bcl-2对凋亡的保护作用。与bcl-2及其家族成员相比,Bak具有相似的结构特征,特别是在BHI和B也结构域上。此外,Bak与bcl-2、bcl-xL和Bax的同源性分别为25%、22%和19%。Bak蛋白在碳末端还含有疏水的跨膜结构域,表明其以整合的膜蛋白的形式存在。

近年来,对Bak基因的研究逐渐深入。与Bax类似,Bak基因产物能够增加细胞对各种刺激的凋亡反应。研究发现,Bak基因能够显著诱导HCC-9204细胞(p53基因已突变)发生凋亡,可能作为p53基因突变的肿瘤中诱导细胞凋亡的效应分子。最近,一项研究发现,Bak能够接受药物引起的细胞凋亡信号并引起细胞损伤,但在正常情况下受到其他分子的控制。

为了使Bak处于活性状态,必须使其脱离当前的“记忆状态”并发生蛋白质构象的改变。一旦构象发生改变,Bak就能够接受细胞损伤性刺激并诱导细胞死亡。因此,通过体外转染Bak基因,增加细胞中Bak的表达,可以诱导细胞凋亡,这可能成为肿瘤基因治疗的一种新策略,特别是针对p53基因已发生突变的肿瘤。

Bak抗体是一种用于检测Bak蛋白水平的抗体。它通过人工合成的人Bak蛋白Gly82附近的多肽进行适当修饰后免疫兔子制备而成。Bak抗体能够识别总Bak(total Bak),并且不与其他Bcl-2家族蛋白发生交叉反应。该抗体产品为无色溶液,含有100 ug抗体。浓度为0.5 mg/ml,溶解于含有30%甘油、0.5% BSA、5 mM EDTA和0.01%硫柳汞的PBS(pH 7.2)缓冲液中。

Bak抗体和Western一抗稀释液均可在-20℃或4℃保存,有效期为一年。对于Western抗稀释液,优先推荐4℃保存,长期不使用时可考虑-20℃保存,但冻融可能会导致轻微的浑浊和少量不溶物。在进行Western实验后,请注意回收稀释的抗体。回收的抗体可以重复使用至少10次。稀释后的抗体,包括已经使用过的稀释抗体,应在4℃保存。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况,则应考虑废弃该抗体。

主要参考资料

[1] 李江, 于欣欣. Bak 基因过表达诱导肝癌细胞凋亡[J]. 癌症: 英文版, 2000, 19(9): 891-895.

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