首先，让我们了解一下CAY10603的生物活性：
1）体外活性
CAY10603（化合物7）对胰腺癌细胞系BxPC-3，HupT3，Mia Paca-2，Panc 04.03和SU 86.86表现出有效的抑制活性，其IC50值分别为1, 0.3, 0.1, 0.1, 0.6，和<0.5μM。此外，CAY10603还抑制了HDAC6的脱乙酰酶活性，并抑制了肺腺癌细胞的增殖。它还能诱导肺腺癌细胞的凋亡。与吉非替尼联合使用时，CAY10603能够协同诱导肺腺癌细胞的凋亡，部分原因是通过去稳定化EGFR和失活EGFR通路[2]。
接下来，我们将介绍如何进行CAY10603的活性实验。一般来说，有以下两种方法：
1）细胞实验
从ATCC获得胰腺癌细胞系BxPc-3，HupT3，Mia Paca-2，Panc 04.03和SU 86.86，并在含有10％胎牛血清和1-谷氨酰胺的培养基（DMEM或RPMI）中培养。将胰腺癌细胞分别铺在96孔微量滴定板的6个孔中，每孔2.5-4P103个细胞。接种后4小时，用稀释剂（DMSO）或不同浓度的SAHA或指定的HDACI处理各孔，浓度范围为1nm至50mm。在处理后72小时，使用MTT比色法测量细胞毒性。使用XLfit计算IC50值。
2）激酶实验
CAY10603（化合物7）对胰腺癌细胞系BxPC-3，HupT3，Mia Paca-2，Panc 04.03和SU 86.86表现出有效的抑制活性，其IC50值分别为1, 0.3, 0.1, 0.1, 0.6，和<0.5μM。此外，CAY10603还抑制了HDAC6的脱乙酰酶活性，并抑制了肺腺癌细胞的增殖。CAY10603还能诱导肺腺癌细胞的凋亡。与吉非替尼联合使用时，CAY10603能够协同诱导肺腺癌细胞的凋亡，部分原因是通过去稳定化EGFR和失活EGFR通路[2]。
HDAC抑制测定：将纯化的HDAC与1mM羧基荧光素（FAM）标记的乙酰化肽底物和测试化合物在25℃下在含有100mM HEPES（pH 7.5），25mM KCl，0.1％BSA的HDAC测定缓冲液中孵育17小时。和0.01％Triton X-100。通过加入含有0.078％SDS的缓冲液终止反应，最终SDS浓度为0.05％。使用Caliper LabChip 3000系统的蓝色激光激发和绿色荧光检测（CCD2）电泳分离底物和产物。使用Caliper系统上的Well Analyzer软件测定底物中的荧光强度和产物峰。对于每个样品，反应一式两份进行。使用IDBS XLFit版本4.2.1插件和XLFit 4参数逻辑模型自动计算IC50值：（（A +（（B_A）/ 1 +（（C / x）D））），其中x是化合物浓度，A和B分别是估计的抑制百分比的最小值和最大值，C是拐点，D是S形曲线的Hill斜率。使用IDBS XLFit版本4.2.1插件和公式xf4_FitResultStdError自动计算IC50值的标准误差。
通过以上介绍，我们了解了CAY10603的生物活性和实验方法。综上所述，CAY10603是一种有效的选择性HDAC6抑制剂，其靶点活性为HDAC1（271nM）和HDAC6（2pm）。
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