如何使用血液总RNA小量提取试剂盒进行RNA提取? ¹

血液总RNA小量提取试剂盒可以从小于1.5ml的新鲜或冻藏的抗凝血液样品中纯化1-7ug的总RNA。通过使用红细胞裂解液(ERL)去除红细胞，然后加入TRKLysis Buffer裂解白细胞，最后经过柱吸附和洗涤步骤，将RNA溶解于DEPC水中。

RNA提取的方法

与DNA提取类似，RNA提取也是为了去除其他污染物，如蛋白质或脂类。使用有机溶剂将RNA与这些污染物分离。然而，在处理RNA时需要注意几个方面与DNA不同。细胞质中含有大量的RNA酶，它对RNA的降解是分析提取的关键。为了防止RNA酶对mRNA的降解，必须立即进行分离，并将细胞裂解物置于RNA酶变性的环境中。可以使用强变性的异硫氰胍(GTC)来实现。样品可以均浆并在4mol/L的GTC溶液中溶解。然后，通过CsCl密度梯度离心沉淀RNA并与不能沉淀的DNA分离。然后可以使用不同的方法进一步纯化RNA。另一种方法是在变性盐溶液中从均浆的组织中抽提RNA。随后，通过酚抽提去除蛋白质，并用醇沉淀RNA。

血液总RNA小量提取试剂盒的特点

血液总RNA小量提取试剂盒具有以下特点：操作简单快捷，可以直接使用新鲜或冷冻的抗凝全血样品，无需裂解红细胞等预处理步骤，整个提取过程只需约十分钟，可在室温下进行。提取的RNA纯度高，OD260/OD280比值约为2.0，可直接用于RT-PCR和Northern杂交等研究。提取产率一般为2-5μg/mL人血。此外，该试剂盒与常用的抗凝剂(包括肝素、EDTA、柠檬酸、草酸)兼容。血液总RNA小量提取试剂盒可在常温下运输，4℃保存，有效期为一年。

主要参考资料

[1] 分子生物技术导论