我跑sd大鼠胰腺组织的yap及p-yap蛋白（65-78kd）的wb已经有好几个月了，期间偶尔跑出过一两次，但是重复性很差，经常是空白条带或者是一片灰。
关于我跑wb的一些细节。
1.用的是10%的胶，上样量是20微；
2.nc膜，转膜条件100v，100min，转膜后丽春红染色可以看见条带；
3.5%脱脂牛奶室温封闭1.5-2h；
4.一抗用的是cst的抗体按说明书配的1:1000，4摄氏度孵育过夜；
5.tbst洗5min*3次；
6.二抗用过1：1000和1：500的感觉差不多，该出不来还是出不来，确定种属是没有加错的；
7.tbst10min*3次；
8.ecl反应三分钟胶片曝光，压过半小时也还是没有，内参是有的。
想发图，但是这个论坛真的很难用诶？！
