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如何使用植物基因组DNA提取扩增试剂盒? 1

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植物基因组DNA提取扩增试剂盒是一种用于从植物组织和植物干粉中提取总DNA的工具。它可以提取包括基因组DNA、线粒体DNA和叶绿体DNA在内的DNA样品。该产品适用于处理多达100 mg的样品,并可纯化获得最大为50 kb的DNA,其中大多数片段在20-30 kb之间。

该试剂盒采用先进的硅胶膜技术和简单的离心程序,无需乙醇沉淀,可以快速、简单地分离高纯度的DNA,并有效去除PCR和其他酶促反应的抑制剂。使用该试剂盒,您可以在1小时内完成总DNA的提取,并获得纯化后的DNA,可直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

植物基因组DNA提取胶图

如何操作?

1、取植物新鲜组织约100 mg或干重组织约20 mg,加入液氮充分研磨。

2、将研磨后的粉末收集到离心管(自备)中,加入700μl 65℃预热的Buffer GP1(使用前在预热的Buffer GP1中加入β-巯基乙醇,使其终浓度为0.1%),迅速颠倒混匀后,将离心管置于65℃水浴20分钟,水浴过程中颠倒离心管混匀样品数次。

3、加入700μl氯仿,充分混匀,12000rpm(~~13400×g)离心5分钟。

4、小心将上层水相转入一新的离心管(自备)中,加入700μl Buffer GP2,充分混匀。

5、将步骤4中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中。若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤7。

8、12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。

9、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-100μlBuffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。

有哪些应用?

用于中药川麦冬及白术特异性PCR鉴定方法的研究

1、使用植物基因组DNA提取试剂盒提取麦冬及白术等24种植物的基因组DNA。提取到的植物基因组DNA长度为23 kb左右,OD260/OD280数值在1.79-1.93之间,浓度为121541μg/mL。

2、根据川麦冬分子鉴定标记(命名为CM503)的序列,设计川麦冬特异性引物CM1/CM2,通过在297 bp处是否出现特异性扩增条带,建立了川麦冬特异性PCR鉴定方法。并对该鉴定方法的准确性、灵敏度及对混合样品的检测效果进行研究。该方法能在多种植物中准确鉴别出川麦冬,具有高灵敏度和良好的重复性,能够检测混合样品。

3、利用RAPD技术对四种不同产地的白术进行分子鉴定标记的筛选,共筛选出了5个分子鉴定标记,包括1个河北小白术分子鉴定标记和4个浙白术分子鉴定标记。

参考文献

[1]A Caco-2 cell-based quantitative antioxidant activity assay for antioxidants[J].Hongxia Wan,Haiyan Sun,Xiangying Yu,Yan Li,Dong Liu.Food Chemistry.2014

[2]Macrophage activation by polysaccharides from Atractylodes macrocephala Koidz through the nuclear factor-κB pathway[J].Guang-Quan Ji,Ren-Qiong Chen,Jian-Xian Zheng.Pharmaceutical Biology.2014(4)

[3]Biological identifications through DNA barcodes[J].Hebert Paul D.N.,Cywinska Alina,Ball Shelley L.,deWaard Jeremy R..Proceedings of the Royal Society B:Biological Sciences.2003(1512)

[4]Determination of the Components in a Chinese Prescription,Yu-Ping-Feng San,by RAPD Analysis[J].Kur-Ta Cheng,Hsin-Sheng Tsay,Chieh-Fu Chen,Tsue-Wei Chou.Planta Med.1998(06)

[5]陈强.中药川麦冬及白术特异性PCR鉴定方法的研究[D].浙江工业大学,2015.

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