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5L生物反应器培养CHO-S细胞表达单抗,乳酸浓度一直升高?

最近在做5L生物反应器培养CHO-S细胞表达单抗,接种3天后检测乳酸发现已经有3.0g/L了,之后乳酸浓度一直升高,最高是7.0g/L,而且细胞密度也比较低(5*10^6),另外培养基pH下降比较快,进碱量比较多。培养条件:转速80rpm,溶氧50%(氧气校正的溶氧电极),空气氧气混合进气调节pO2,pH7.0,碳酸氢钠和CO2调节pH。之前做摇瓶实验的时候,接种第三天乳酸浓度是2.0g/L,之后持续降低,到培养结束后基本为0,培养过程中没有用碱调节过pH。

问题:(1)摇瓶和生物反应器中乳酸的变化差异很大,是什么原因造成的(个人猜测是pO2和pH有关,由于摇瓶没有在线检测pO2和pH,所以不知道摇瓶培养过程中的参数);如何在生物反应器中减少乳酸的生成(与摇瓶一致),个人试过低糖培养,效果不是很好,还试过HIPDOG,效果还行,但表达量下降了。

(2)在生物反反应器中pH下降比较快,进碱量多的问题怎么破?我的做法是持续通空气,降低CO2在培养基中的溶解,pH下降相对慢一点,有木有其他办法?因为碱量多了渗透压升的很快。

(3)大家做生物反应器培养CHO细胞时,培养参数是什么(感觉看的文献参数都差不多,实际培养时是不是这样的?)

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共1个回答
1. CHO-S细胞的生长一般不是问题,个人感觉你的转速偏低,提高转速之后,再计算叶尖速度,一般低于1.2m/s不用担心剪切力的问题。2. 溶氧的校正一般是用空气而不是纯氧校正,通常使用的30-50%就是用空气校正之后的比例,所以你的50%肯定会偏高,从而使得氧气通气量大增。3. 小泡供氧+大泡供空气使得Vs很高,微泡在液面表面爆炸后的杀伤力远大于剪切力(几个数量级的差距),所以推测你的细胞受到了极大损伤,自然就会长得慢,活率下降,进而乳酸消耗不了反而增加的现象。4. 第一次在罐上重复摇瓶实验时,pH的dead band不要太窄,0.2-0.3都可以,至于Glycan的问题,这个因细胞株而异,有的并没有那么明显最后,在提高转速,用空气校正溶氧和大泡供氧,通气量下降后,罐上应该是能重复你的摇瓶数据。
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