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硅胶柱层析时,拌样硅胶和空白硅胶的比例怎么控制?

我最近都在做植化分离,过了几次硅胶柱层析,有个问题不解:拌样硅胶和空白硅胶的比例怎么控制?文献说是说1:10-1:20,但实际中我做到1:5都不行,后来做到1:4才不过载,柱径比控制为1:10。请问这样做行吗?


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共3个回答
我们一般都是样品和拌样的硅胶比例为1:2到1:3,只要分散得好,少一点也无所谓。实际操作和理论有一定距离的。
拌样的硅胶越少空白硅胶越多越好了这样分离效果才好。正如塔板理论中的塔板数越多一样的 但是对于硅胶柱他的吸附性很强不能让空白硅胶的量很大。一般来说 拌样硅胶:样品=1—2:1 最好别超过2。另外对于大柱子 拌好样硅胶量:空白硅胶量约为1:5 对于小柱子为1:10-20最合适。装硅胶柱很讲究的。
拌样硅胶使用的目的是使你的样品能够分散均匀,因此不是固定的,要看你样品的性质来定,确实是越少越好。硅胶用量少,你的上样带越窄,按照楼上说的层析理论扩散分离等影响因素才越小,出来的样品分离效果才好。如果用的硅胶太多,相当于样品没跑已经有成分的重叠,非常不利于分离,应尽量避免。你说的空白硅胶应该指的是分离空白硅胶柱吧,这个的用量要看你上柱的目的是什么,如果是粗分,可以比较小些,柱子短粗,这样分离速度快;如果是分离组分的细分,就要细长、高些,这样分离效果比较好,柱效比较高,容易得到纯品。
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