蛋白的GST质粒构不出来，最后转化（用的BL21菌株）没有阳性点，问题是什么?

我在构某蛋白的GST质粒，已经有构好的FLAG做模板了，pcr，酶切条带的跑胶位置都是对的而且很亮，就是最后转化（用的BL21菌株）没有阳性点。已经重复3次了。求问问题可能出在哪？ps：连接16℃过夜和3h都试过了。