pcr跑不出目的条带？

之前梯度的时候跑出来了想要的条带，这几天在同样的温度下怎么都跑不出来，只有二聚体，请各位给看一下什么情况，体系是buffer2.5 dntp2.0 mg1.5 cdna1 f1 r1 extaq0.2 ddh2o补齐至25   pcr体系是94三分钟 94三十秒 ？？？三十秒 72一分半 35个循环 72七分钟 四度保存 重新设计的全长引物，之前二聚体都少，现在能看到二聚体，之前也看到过很多条带，现在条带跑不出来了，只能出来二聚体