1、Q: 支原体污染对细胞有什么危害?A: 支原体污染后,不会使细胞死亡可以与细胞长期共存,培养基一般不发生浑浊,细 胞无明显变化,外观上给人以正常感觉,实则细胞收到多方面潜在影响,如引起细胞变形, 影响 DNA 合成,抑制细胞生长等,以致影响实验数据的可信度。2、Q: 支原体污染有什么特征?A: 细胞状态变差,生长变慢,在显微镜下观察可能会有小黑点,但培养基一般不发生 浑浊。细胞传代以后就出现细胞间黑点,细胞空泡化,很多类似凋亡、坏死的细胞,最终细 胞漂浮,完全死亡。具体特征请见附件 2。3、Q: 细胞培养时,显微镜下的小黑点是什么?A: 支原体污染后,细胞凋亡坏死,释放出大量碎片,看起来就像小黑虫子。4、Q: 细胞通过何种途径感染支原体?A: 支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染(某些支原体在人体是 正常菌群如口腔中的支原体)、培养基的污染、被污染细胞造成的交叉污染、实验器材 的污染、制备细胞的原始组织或器官的污染等等,由于支原体大小为 0.1~0.8 um,无细 胞壁,可透过一般过滤膜(0.22-0.45 um),血清中也可能含有支原体。Cell+细胞卫士 _ _ MycoTest Kit(支原体检测试剂盒):支原体:黑色的,好象多为多形,培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢死去。MycoTest Kit是利用降落聚合酶链式反应技术(TD-PCR)对支原体16S rRNA 基因高度保守区域特异性片段进行扩增检测。该方法灵敏度高,特异性强,可用于各种生物材料(如细胞培养基、实验动物分泌物、动物血清等)支原体感染的检测。Cell+细胞卫士 _ _ Nocard Treatment(支原体清除剂):(1)推荐Nocard Treatment的稀释比例为1:1000,例如:1 mL培养基加入1 μL的Nocard Treatment;(2)弃去旧的培养基,用PBS将细胞清洗干净,再加入新鲜的含有Nocard Treatment的培养基,1天1次,连续处理3-6天。