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保留时间变化很大,求帮忙分析原因。?

API的保留时间有时25min,有时30min,目前没找到规律。每次配置后保留时间差别很大,同一次配置的流动相保留时间基本接近(溶液稳定性24小时中间有关空调,保留时间变化1min左右)。查了相关资料,没发现这流动相有什么特殊啊。流动相每次配置都尽量一致了。流动相为 磷酸二氢钾缓冲液(取磷酸二氢钾 6. 8g,辛烷磺酸钠 1g,加水1000ml 使溶解,用磷酸调节pH 值至3. 3)-乙腈-甲醇(80 : 10 : 10) ,C18色谱柱,柱温 35度。想请教一下保留时间变化很大的原因。


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共5个回答
试试把三种流动相:磷酸二氢钾的缓冲液-乙腈-甲醇按比例80 : 10 : 10混合均匀后再用,用一个泵走。我以前做过一种磷酸缓冲液和乙腈为流动相的,分别放在两个瓶里两个泵进,就会有出峰时间不一致的现象。
由于用到离子对试剂,感觉pH值影响的可能比较大,试试做个耐用性的条件,大致看一下影响因素。还有,你说的保留时间不稳定,是同一流动相同一时间检测的结果   还是不同天配制的流动相。另外,稳定性实验保留时间差了1min,感觉有必要做一下流动相的稳定性,一般这种有盐的流动相都是临用现配的。
两方面原因:一是辛烷磺酸钠作为离子对试剂自身不稳定,试剂开口一小段时间就需要换,防止变质;二是辛烷磺酸钠本身是两亲性物质,容易产生气泡,我们用液相色谱分离增益阀能够解决这个问题。
如果流动相本身没有问题的话 可能就是化合物本身的问题  流动相的pH是否接近API 的pKa 最好考察一下。
辛烷磺酸钠,是离子对试剂,需要平衡色谱柱的时间需固定,再就是容易产生气泡,量取混合的体积可能会有差异。
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