如何制备Ac-DEVD-pNA底物? ¹

Ac-DEVD-pNA是一种常用的底物，用于检测细胞中caspase-3和caspase-7的活性。本文介绍了制备Ac-DEVD-pNA的方法。

制备方法

Ac-DEVD-pNA的制备步骤如下：

1）合成Ac-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Val-Asp(OtBu)-pNA

首先，取Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Val-Asp(OtBu)-pNA(1.44g，1.8mmol)，加入到圆底烧瓶中，并加入DCM(40ml)。搅拌反应后，缓慢滴加乙酸和三乙胺。反应液会立即变为琼脂状，继续搅拌后加入二氯甲烷。反应完成后，进行避光反应。最后，通过真空浓缩、乙醚碾磨、真空过滤和干燥，得到白色固体粉末(产率为91%)。

2）合成目标产物Ac-DEVD-pNA

取得到的1.32g Ac-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Val-Asp(OtBu)-pNA，加入三氟乙酸/二氯甲烷溶液中。在室温下避光撹拌反应后，进行真空浓缩。残留液经过乙醚碾磨三次后，进行真空过滤和干燥，得到白色稍带浅棕色粉末固体(产率为91.4%)。

参考资料

[1] Caspase-3/7底物的合成及其相关荧光分子合成新方法的研究