什么是DAB显色试剂盒? ¹

DAB显色试剂盒是一种用于免疫组化显色的试剂盒，可以在细胞或组织的免疫组化或原位杂交过程中使用。它利用辣根过氧化物酶（HRP）进行显色，产生棕色沉淀物。

DAB显色试剂盒中的DAB是指3,3-N-二氨基苯胺四盐酸盐，是辣根过氧化物酶最敏感、最常用的底物。在辣根过氧化物酶的作用下，DAB会产生棕色沉淀物。这种棕色沉淀物不溶于水、乙醇和二甲苯，因此在DAB显色后，可以使用溶于乙醇的染料进行后续染色。过氧化物酶会使底物发生反应，在反应部位产生棕色沉淀物。标本的显色时间一般为室温下的5-20分钟，之后可以在显微镜下观察显色情况，显色充分后应及时脱水封固。显色的终产物可以直接在光镜下观察，也可以经过OsO4处理后增加反应产物的电子密度，用于电镜观察。

如何使用DAB显色试剂盒？

1. 对于组织切片、细胞样品或膜，在与辣根过氧化物酶标记的抗体或其他形式的探针孵育后，使用适当的洗涤液进行洗涤，每次洗涤3-5分钟，重复3-5次。对于检测内源性辣根过氧化物酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也使用适当的洗涤液进行洗涤。

2. 将试剂A和B等量混合，配制成DAB染色工作液。

3. 在最后一次洗涤完毕后，去除洗涤液，加入适量的DAB染色工作液，确保样品能够被充分覆盖。

4. 在室温避光条件下孵育样品，时间可以在3-30分钟或更长时间（最长可达24小时），直至显色达到预期的深浅。

5. 去除DAB染色工作液，用蒸馏水洗涤1-2次，以终止显色反应。

6. 对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，如果需要可以使用中性红染色液进行染色以便于观察。对于膜，显色反应终止后，可以在室温下晾干并避光保存。

DAB显色试剂盒的应用

在弥漫性轴索损伤和免疫组织化学研究中的应用

弥漫性轴索损伤（DAI）的诊断一直是神经科学、法医病理学实践和研究中的一个重要难题，特别是对于伤后迅速死亡的DAI案例，缺乏客观准确的检测方法。

以往的检测方法主要在亚细胞水平上检测轴索损伤后的形态学变化和某些生物标记物的表达变化，主要通过银染法和免疫组织化学染色方法来检测轴索损伤。然而，这些方法在诊断DAI时存在一些缺陷，比如银染法无法发现急性期的轴索损伤，而各种免疫组织化学的生物标记物无法区分原发性和继发性的轴索断裂。同时，这些标记物严重依赖于轴索损伤后的形态改变，即只有在轴索出现明显形态改变的时间窗内才具有诊断价值。轴索损伤后，髓鞘、轴膜、轴索内微结构甚至轴索间隙的改变都可以引起损伤局部区域水分子的弥散特征改变，而且随着损伤时间的延长，水分子的弥散也可能出现一定的变化规律。

参考文献

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