人胚肾细胞是一种高转染效率的衍生株,通过插入SV40T-抗原的温度敏感基因来产生。这种细胞可以表达SV40T和EBNA1。
复苏293/人胚肾细胞的方法如下:
1)从液氮中取出冻存管,立即放入37℃的水浴锅中,并轻轻摇动。待液体完全融化(大约1-1.5分钟),取出并喷洒酒精,放入超净工作台。
2)将细胞悬液吸入装有10ml培养基的15ml离心管中(用培养基洗涤冻存管,以将附着在管壁上的细胞洗下来),以1000转离心5分钟。
3)倒掉上清液,加入1ml培养基将细胞悬浮。将悬浮液轻轻摇动,使细胞均匀分布在装有10ml培养基的10cm培养皿中。
4)在培养皿上标明细胞种类、日期和培养人的名字,然后放入CO2培养箱中培养。细胞贴壁后,每隔3天更换一次培养基。
有研究探讨了地高辛衍生物对293/人胚肾细胞上延迟整流钾电流(IK)的影响。研究使用磷酸钙瞬时转染的方法,将人心肌细胞上的延迟整流钾电流通道蛋白基因(humanEther-a-go-goRelatedGene,HERG)转染到人胚肾细胞中,然后使用全细胞膜片钳技术记录地高辛甲和地高辛乙两种衍生物在浓度为1、10、100nmol·L-1时对HERG钾通道时间依赖性电流(Istep)和尾电流(Itail)的影响。
结果显示,地高辛衍生物甲和地高辛类似,对HERG钾通道时间依赖性电流和尾电流均呈现剂量依赖性抑制。其半数最大抑制浓度IC50分别为20.61和22.69nmol·L-1。而地高辛衍生物乙对HERG钾通道延迟整流钾电流没有抑制作用。
[1] 地高辛衍生物对人胚肾细胞293延迟整流钾电流的作用