什么是MONOCLONAL ANTI-GAPDH小鼠抗? ¹

MONOCLONAL ANTI-GAPDH小鼠抗是一种特异性结合ANTI-GAPDH的单克隆抗体，可用于多种免疫学实验，如Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等。

检测原理：采用双抗体夹心法测定标本中ANTI-GAPDH水平。首先将纯化的ANTI-GAPDH抗体包被在微孔板上，形成固相抗体。然后依次加入ANTI-GAPDH和HRP标记的ANTI-GAPDH抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后，加入底物TMB进行显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，然后在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅与样品中的ANTI-GAPDH呈正相关。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），可以计算样品中ANTI-GAPDH的浓度。

GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）的英文缩写。GAPDH是糖酵解反应中的一个酶，在各种组织的细胞中广泛分布。

GAPDH是参与糖酵解的关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量为146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因在几乎所有组织中都高水平表达，被广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。由于GAPDH作为管家基因在同种细胞或组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，因此在使用GAPDH内参抗体时，可以将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除，得到每个样品目的蛋白的相对含量，然后再进行样品与样品之间的比较。

MONOCLONAL ANTI-GAPDH小鼠抗的应用领域是什么？

用于研究GAPDH在帕金森病发病机制中的作用

本研究旨在研究鱼藤酮对PC12细胞内糖酵解关键酶GAPDH的表达、亚细胞定位及糖酵解活性的影响。

研究方法：将鱼藤酮作用于体外培养的神经生长因子诱导分化的PC12细胞，使用FITC-Annexin V/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡水平；通过实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹分析检测鱼藤酮对PC12细胞内GAPDH mRNA和蛋白表达水平的影响；使用亚细胞组分分离和Western blot观察GAPDH的亚细胞定位变化；采用分光光度法测定鱼藤酮处理后细胞内GAPDH糖酵解活性的改变。

研究结果显示，鱼藤酮可以诱发PC12细胞凋亡，而且鱼藤酮处理后细胞内GAPDH mRNA和蛋白表达水平随时间的延长呈升高趋势。然而，随着处理时间的延长，GAPDH的糖酵解酶活性反而下降。亚细胞组分分离和Western blot进一步证实，鱼藤酮处理后GAPDH主要在细胞核和线粒体组分内增多。

结论：鱼藤酮可以诱发GAPDH的过表达，抑制GAPDH的糖酵解活性，并导致GAPDH亚细胞定位的改变。这可能是鱼藤酮诱导的多巴胺能神经元凋亡的重要机制之一。

参考文献

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[5]黄金莎.GAPDH过表达及异常聚集在帕金森病发病机制中作用的研究[D].华中科技大学,2009.