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如何使用改进的SDS-碱裂解法提取高纯度质粒DNA? 1

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本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,离心吸附柱内的玻璃纤维素膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从玻璃纤维素膜上洗脱。

本产品和普通产品的区别在于配有BlueLysis,它是一种和质粒提取试剂盒配套使用的颜色指示剂。在溶液P1里面加入BlueLysis,可以直观地通过颜色改变来监测质粒提取过程中菌体重悬是否充分、裂解是否均一、中和沉淀是否完全,这样可以避免一些常见操作问题。因此特别适合于经验不太丰富初学者和希望确保每个操作正确并得到最大产量的富有经验的研究人员。每次处理1-5ml菌液。获得的质粒DNA产量高、纯度好,可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录和测序等各种分子生物学实验。

产品特点

1.易于观察:实验过程中的颜色变化帮助您直观判断实验现象,特别适合初学者及教学使用。

2.产量高:正常操作下提取出的超螺旋DNA大于90%。获得的质粒产量高、纯度好,可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录和测序等各种分子生物学实验。

3.简便安全:快速、方便,不使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。

4.重现性好:采用进口特制吸附膜,柱与柱间吸附量差异极小,克服国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

5.配有BlueLysis,大大提高操作方便性和产量。

6.独有的去蛋白液配方,可以高效去除残留的核酸酶,即使是核酸酶含量丰富的菌株如JM系列和HB101也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。

适用范围

用于小规模质粒制备(Mini Preparations)。

产品储存

1.首次使用请将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1(终浓度100μg/ml) 置于2-8℃保存。如果溶液P1中RNase A失活,提取的质粒可能会有微量RNA残留,在溶液P1中补加RNase A即可。

2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会出现浑浊或析出沉淀,在37°C水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量泡沫。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化和pH值变化,各溶液使用后应及时旋紧盖子。尤其100× BlueLysis含有高浓度乙醇,更要及时封口膜封好,防止挥发。

主要参考资料

[1] 可视化高纯度质粒小量快速提取试剂盒产品说明书

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