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蛋白质标准品的选择有哪些级别? 1

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蛋白质标准品是蛋白分子量的标准,可以分为未染色和预染色两个级别。以下是关于未染色蛋白分子量标准的介绍。

蛋白质标准品

未染色的蛋白分子量标准是最简单、最准确的一种。由于没有附带染料分子或标记分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,是精确判断蛋白大小所必需的。现在的标准品多数都选用预混和的Marker,方便不同大小的蛋白比较。预混的Marker通常有几条带加倍浓度作为指示,因为混合的条带越多,越不好记,谁知道哪条是那条!数到眼都花了。所以当看到特别浓的那几条标志带就记得是哪里了。不过要记得,小带通常都不那么容易看清楚的。在选择上来说,当然是选择其中至少有一条条带和自己的目的蛋白大小相近的最好,越近越好。如果你的蛋白不幸在两条跨度较大Marker条带之间,选别的Marker吧。预混的Marker使用上不如预染Marker(pre-stained)好用,因为电泳过程中完全看不到,要和目标蛋白一起等到最后染色才“开蛊”,无法对实验起预示参照作用。完全属于“后知后觉”型的,当然还是比“不知不觉”不做对照的要好。

1、宽分子量蛋白标准

如果从实验室总体考虑的话,就选范围尽量宽,条带分布比较均匀的标准品,这样你的蛋白无论在哪个区间都容易判断,避免正好落在一段空白区的危险。不过条带越多,每次上样量也就越费。拿到Marker后,如果买的是大包装,就应该考虑分装。多次反复冻融对于蛋白的危险,不用多说吧。另外要记得,宽谱的Marker不一定每条都能看到的,特别是Mini Cell。如果侧重大蛋白,那小的可能就已经跑掉了,不是质量不好哦。

2、高分子量蛋白标准

通常在检测大分子量蛋白时经常使用高分子量蛋白标准。

3、低分子量蛋白标准

在一般的蛋白电泳中,更常用的是低分子量蛋白标准,除了有指示蛋白大小的作用外,有时还可以用作粗略的定量。实验室用在一般蛋白电泳的低分子量蛋白标准中。

在低分子量蛋白标准中还包括特别小的蛋白标准,比如30kD以下蛋白或多肽的分离辨别。其中GE的从2kD到16kD之间有6条带的蛋白标准挺不错,另外提醒一句,特别小的蛋白质标准品条带如果要显色好,上样一定要上足够的量哦。

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