SFDA中关于工程菌种库建立时要求对基因型进行RAPD鉴定方法,有谁做过这方面的工作吗?该如何操作(对照?引物?)?PCR并电泳后如何判断其基因型?
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下文为SFDA原文摘录
2.工程菌库
工程菌主种子库和工作种子库的建立和检测应按现行《中国药典》相关要求建立。
(1)工程菌主种子库的检定
①菌种同一性鉴定:菌种/株的来源、基因型及表型。基因型通
过RAPD方法鉴定,通过测定重组质粒的特殊标记和抗药性标记确定表型。
②菌种培养纯度检定:外源因子(如杂菌、真菌、
噬菌体等)的检测。
③菌种稳定性检定:转化菌的比例,扩增条件、质粒拷贝数,基因表达量、允许的传代次数。
④基因表达盒序列分析:插入的目的片段以及调控序列进行测序分析。
(2)工程菌工作种子库的检定
除外基因表达盒序列分析,其它检定内容按上述工程菌主种子细胞库的检定。