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用fura-2 AM 测定钙离子浓度,如何计算?


测定平滑肌细胞内的 钙离子浓度,用的荧光染料是fura-2AM,所用的仪器是荧光分光光度计(型号是cary eclipse)。

但是文献都说仪器会自动计算出结果, 而我用的这台仪器却不能计算出最终的钙离子浓度,而只能反映出在340nm和380nm处荧光强度和二者的比例,我必须自己计算钙离子浓度。

我当时按照文献说的公式计算了[Ca2+]i = Kd[(R-Rmin)/(Rmax-R)](Fmin/Fmax),所用的kd是224。请问这样有错误么?

急盼大家的指导。在此不胜感激!


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共1个回答
这样计算是对的。不过fura 2的两个激发波长都在紫外区,如果你测荧光的时候用的是透明塑料板,对所得的荧光值是有很大影响的。
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