刚开始做生物材料生物相容性方面的研究。有个问题想咨询一下大家。谢谢!
我准备做细胞增殖实验,把细胞接种至生物材料上,用cck-8试剂盒检测其OD值判断材料对细胞增殖的影响。我的问题是:
1.细胞接种密度的问题。我养的是大鼠的BMSC,拟用48孔板培养,文献报道大多为96孔板或2孔板,48孔板不太多,所以想请教一下大家细胞接种密度多少合适?
2.CCK-8试剂盒说明说每孔加10ul CCK-8液,但这是针对96孔板而言,48孔板的话是不是需要翻倍,加20ul?
3.文献中报道的方法都是说先加一部分含细胞悬液的培养基,孵育一段时间再加培养基。为什么要这样做,为什么不可以一次加至目标量?为什么要分两次加?
4.我们实验室的酶标仪比较老,没有设置48孔板的检测,所以只能用处理后,把上清吸至另一96孔板检测,这样会对结果有影响吗?
5.关于对照和空白组设置,我觉得应该以单纯细胞悬液无材料作为对照组,但实验室有师兄说应该把材料+不含细胞的培养基作为对照组,很困惑。