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小弟刚买回来100克葡聚糖G?

小弟刚买回来100克葡聚糖G-15填料,不知道如何处理,没有说明书----求指导的大神帮帮忙吧!有谁用过的,或者有说明书的给小弟一份吧,我就是不知道,怎么处理,一直到装柱子,具体怎么操作,有谁用过的给指点一下吧!!!!!!谢谢大家了!!!!
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共40个回答
就是乙醇和水要超声之后,再倒入填料里面,还有就是加水或者乙醇的时候必须得搅拌是吧,这个搅拌的力度有要求么?就是有玻璃棒来回的搅拌就行吧?...
搅拌力度没要求,但最好不要碰壁,因为这样容易破坏凝胶的结构。
我就把我的填料和去离子水的悬浮液的烧杯,直接放在超声仪里面,超声脱气就行了吧?大概多长时间,这个有限制么?...
填料不超声呀,所用的溶液和水要超声
多洗几次就可以了...
我现在就是把上层的清澈的乙醇倒出来了,之后还有一部分乙醇和填料成浑浊,不能倒了,一倒填料就出来了,这样的话我就可以开始用水洗了是吧?
我泡盐酸那步今天已经快结束了,之后就是水洗到中性了,在上柱子之前,我看你给我留的建议中是---最后抽去溶液及凝胶颗粒内部气泡--这步骤怎么操作啊?还有凝胶要是暂时不上柱子的话,就泡在去离子水里面行么?我看 ...
泡在水里不行,都要保存在20%乙醇里面。你们有抽气泵吗?最好抽一下。
搅拌力度没要求,但最好不要碰壁,因为这样容易破坏凝胶的结构。...
OK,好的,哪我一会就考试试试!有什么问题我还是希望能够及时的向您请教!
太感谢你的回复了,还有一个问题就是上样的时候,我查资料说,最好是凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在1-2%的床体积,这个柱床体积是怎么计算的?我以前没过过柱子,不懂!...
你装完柱子后,凝胶的体积。柱子底面积乘以高。
填料不超声呀,所用的溶液和水要超声...
就是乙醇和水要超声之后,再倒入填料里面,还有就是加水或者乙醇的时候必须得搅拌是吧,这个搅拌的力度有要求么?就是有玻璃棒来回的搅拌就行吧?
葡聚糖G15与G25处理方法一样,供参考。
1.实验凝胶的制备:商品凝胶是干燥的颗粒,使用时需经溶胀处理,称取4克葡聚糖凝胶G—25,加50毫升蒸馏水,搅拌均匀,在室温溶胀6小时,或沸水浴溶胀 2小时,一般采用后一种方法。再用倾泻法除去凝胶上层水及细小颗粒,用蒸馏水反复洗涤几次,再以缓冲溶液(pH7.0的Tris—醋酸溶液)洗涤2—3次,使pH和离子强度达到平衡,最后抽去溶液及凝胶颗粒内部气泡,凝胶可保存在缓冲液内。
2.装柱:将层析柱洗净,垂直固定在铁支架上,选择有薄膜端作为层析柱下口,将下口接上乳胶管并用螺旋夹夹紧。层析柱中加入洗脱液,打开下口螺旋夹,让溶液流出,排除残留气泡,最后保留约2厘米高度的洗脱液,拧紧螺旋夹。将凝胶轻轻搅动均匀,用玻璃棒沿层析柱内壁缓缓注入柱中,待凝胶沉积到柱床下已超过l厘米时,打开下口螺旋夹,继续装柱至柱床高度达到8厘米,关闭出口。装柱过程中严禁产生气泡,尽可能一次装完,避免出现分层。再用洗脱液平衡l至2个柱床体积,凝胶面上始终保持有一定的洗脱液。平衡后,拧紧下端螺旋夹。
因为买的是国产的,我看了一下它就有一个数据:膨胀体积:2.5-3.5ml/g,是不是意思就是我的一克填料大概能膨胀成3克左右,哪我是不是应该加乙醇和去离子水使其膨胀的前处理都是填料的3倍啊?就是我100克的调料加300毫 ...
用乙醇和去离子水的膨胀比不一样的,用乙醇比去离子水的膨胀体积小。应该是1g填料膨胀到2.5-3.5ml。水可以加多点,膨胀完全了,本身就不再吸水了,静止的话会有上清的水出来的。
我就把我的填料和去离子水的悬浮液的烧杯,直接放在超声仪里面,超声脱气就行了吧?大概多长时间,这个有限制么?...
大概15-20分钟的时间
没事,我已经解决了,我多超声一会气泡就没了,我现在已经泡上了,这个是不是得隔一阵子就得搅拌一下,是吧?...
是的
以下供参考:
   凝胶过滤填料的分离范围表
   SephadexG-10葡聚糖凝胶 G-10    分离范围<700 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
   Sephadex G-15 葡聚糖凝胶 G-15    分离范围<1500 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
   Sephadex G-15 葡聚糖凝胶 G-15    分离范围<1500 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
   Sepharose 6B 琼脂糖凝胶 6B    分离范围:1000-5000,适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
   ConA-Sepharose ConA琼脂糖凝胶    分离范围:1000-5000,适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
   Sephadex G-25 Medium 葡聚糖凝胶 G-25 中    分离范围 1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
   Sephadex G-25 Medium 葡聚糖凝胶 G-25 中    分离范围 1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
   Sephadex G-25 Fine 葡聚糖凝胶 G-25 细    分离范围 1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
   Sephadex G-25 Fine 葡聚糖凝胶 G-25 细    分离范围 1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
   SephadexG-50 Medium 葡聚糖凝胶 G-50 中    分离范围 1500-30000
   Sephadex G-50 Medium 葡聚糖凝胶 G-50 中    分离范围 1500-30000
   Sephadex G-75 葡聚糖凝胶 G-75    分离范围 3000-80000
   Sephadex G-75 葡聚糖凝胶 G-75    分离范围 3000-80000
   DEAE Sepharose FF DEAE琼脂糖凝胶 FF    分离范围:3000-80,000
   Sephadex G-100 葡聚糖凝胶 G-100    分离范围 4000-150000
   Sephadex G-100 葡聚糖凝胶 G-100    分离范围 4000-150000
   Sephadex G-150 葡聚糖凝胶 G-150    分离范围 5000-300000
   DEAE Sepharose CI-6B 琼脂糖凝胶CI-6B    分离范围:5000-300,000
   Sephadex G-150 葡聚糖凝胶 G-150    分离范围 5000-300000
   Sephadex G-200 葡聚糖凝胶 G-200    分离范围 5000-600000
   Sephadex G-200 葡聚糖凝胶 G-200    分离范围 5000-600000
   Sephadex G-200 葡聚糖凝胶 G-200    分离范围 5000-600000
   DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝胶 A-25    颗粒大小:40-120μm 分离大小:小蛋白及巨大分子
   DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝胶 A-25    颗粒大小:40-120μm 分离大小:小蛋白及巨大分子
   DEAE Sephades A-50 DEAE DEAE葡聚糖凝胶 A-50    颗粒大小:40-120μm,分离范围:小蛋白及巨大分子
  做纯化的人可能经常接触到sephadex,BIO-Gel,sephacryl s-,sepharose BIo-Gel等几种填料,有时会混淆在一起,看到一个贴子较好的介绍了这些填料的区别,希望对大家有用。sephadex(葡聚糖凝胶):是由葡聚糖苷和3-氯-1,2环氧丙烷以醚键相互铰链而成,不同型号的葡聚糖凝胶用英文字母G表示,如G-25,G-75等,G后面的数字为凝胶吸水量再乘以10。sephacryl:为葡聚糖偶联丙烯基,再和甲叉双丙烯酰胺聚合而成的介质。它有较高的硬度,能承受比普通凝胶更大的静水压力,由于属于部分大网孔型凝胶,可用于分离蛋白质、核酸、多糖和蛋白聚糖甚至是病毒颗粒。sepharose琼脂糖:瑞典称sepharose;美国称Bio-gel A;英国称Segavac;丹麦称Gelarose。Sepharose主要有三种型号:2B,4B,6B,阿拉伯数字表示凝胶中干胶的百分含量。
   Bio-GA有6个型号:0.5M,1.5M,5M,15M,50M,150M。阿拉伯数字乘以1000000表示排阻限度。Sagavac分为:2F,4F,6F,8F,10F2℃4C6℃8C10℃阿拉伯数字表示凝胶中干胶的百分含量,F表示粉末状,C表示颗粒状。Gelarose有5种类型:2%,4%,6%,8%,10%。百分数表示干胶量。琼脂糖凝胶属于大孔胶,由于其工作范围的下限几乎相当于葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶的上限,所以多用于分离400000以上的物质,比如核酸和病毒。聚丙烯酰胺凝胶:由单体丙烯酰胺合成线性多聚物,商品名为Bio-Gel P,有十种类型:从Bio-Gel P-2到P-300,p后面的阿拉伯数字乘以1000即相当于排阻限度。这种胶在极端ph下可被水解,水解后形成的羧基,具有离子交换的性质。另外,sephadex G是葡聚糖凝胶交联的,用于除盐和纯化,BIO-Gel P-是聚丙烯酰胺凝胶,它们的刚性都不是很好,尤其是得水值越大的,越是如此。而sephacryl s-,是经过接枝再交联的葡聚糖凝胶,刚性比sephadex G好很多,如果你纯化的物质分子量小些,那可以用sephadex G是,中等偏大的选择sephacryl s-,特别大的就得选择sepharose(琼脂糖凝胶),例如几十到上百KD的蛋白,或者是病毒,大分子的超螺旋DNA等,而BIo-Gel A也是琼脂糖凝胶。它们只是不同的公司而已,性能差别不大。
其实好多方法都是大同小异,用乙醇,去离子水溶胀都可以,但是最后都要是水。还有上柱子的话最好是用水上,否则你弄得柱子和仪器上都是缓冲液,干了以后不好清洗,很容易腐蚀仪器。比例的话你可以看一下说明书,应 ...
还有您说的这句----再以缓冲溶液(pH7.0的Tris—醋酸溶液)洗涤2—3次,使pH和离子强度达到平衡,最后抽去溶液及凝胶颗粒内部气泡,凝胶可保存在缓冲液内。 那上柱子的时候这个凝胶不就是在缓冲溶液中么?
我是不是最后要把缓冲溶液去掉,之后再加入水,之后装柱子呢?求指教!
葡聚糖G15与G25处理方法一样,供参考。
1.实验凝胶的制备:商品凝胶是干燥的颗粒,使用时需经溶胀处理,称取4克葡聚糖凝胶G—25,加50毫升蒸馏水,搅拌均匀,在室温溶胀6小时,或沸水浴溶胀 2小时,一般采用后一种 ...
大神,这是我求到的一个方法,它这里没有提到用缓冲溶液泡,这个步骤靠谱么?

3.1 乙醇浸泡(300毫升无水乙醇加高纯水至500毫升定容)--超声15分钟脱气
    在室温下,将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶溶胀,用无盐水洗去残存的乙醇滤干。
3.2 无盐水浸泡(高纯水500毫升—超声脱气15分钟)
    室温下,在无盐水中充分溶胀24小时,间隙搅拌,以保证凝胶的完全溶胀。
3.3 盐酸浸泡(取4.17毫升浓盐酸加水稀释到500毫升)----超声脱气15分钟
    在常温下再用0.1M HCl浸泡12小时,间隙搅拌,滤干,水洗至中性。
室温下,将干粉浸泡于50%-60%乙醇中至少24h,不断搅拌已保证凝胶溶胀,用无盐水洗去残存的乙醇滤干。

求问它这个最后一步,是不是就是用去离子水多洗几次把乙醇带出来?这个滤干怎么操作呢?...
多洗几次就可以了
咱们实验室就有水泵和布氏漏斗,抽滤瓶这套仪器,行么?这个操作是把凝胶倒在布氏漏斗里面之后抽滤么?...
放在烧杯里,然后放真空干燥器密闭,抽气
放在烧杯里,然后放真空干燥器密闭,抽气...
这个方法行,我下午试试,还有就是这个抽气的时候,是去离子水和凝胶混合在在一起放烧杯里面抽气,还是把去离子水先倒出来,就单单剩下的凝胶抽气啊?抽完气之后是不是就可以直接上柱子了?最后一步了吧?呵呵!
OK,好的,哪我一会就考试试试!有什么问题我还是希望能够及时的向您请教!...
客气了,尽我所能
泡在水里不行,都要保存在20%乙醇里面。你们有抽气泵吗?最好抽一下。...
咱们实验室就有水泵和布氏漏斗,抽滤瓶这套仪器,行么?这个操作是把凝胶倒在布氏漏斗里面之后抽滤么?
这个方法行,我下午试试,还有就是这个抽气的时候,是去离子水和凝胶混合在在一起放烧杯里面抽气,还是把去离子水先倒出来,就单单剩下的凝胶抽气啊?抽完气之后是不是就可以直接上柱子了?最后一步了吧?呵呵!...
一块抽就可以了,抽完就可以上柱子了。你会装柱子吗?
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