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wb实验结果有些条带不清晰,表达位置不对怎么破?

先爆一张图,一天做的板子,出的36张膜。问题1.煮过的样本会降解吗?问题2:条带表达位置不正确,无论abcam还是proteintech,18的条带都表达35以上,已经排除二聚体原因,还有什么原因呢?



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共5个回答
 煮过的样品再敷另外一种抗体,要看抗体的灵敏度
 18是成熟之后的吧,前体应该是30多。 估计你测到的是前体。
1、煮过变性的蛋白可以短期保存在-20°,我保存过15天没问题。如果长期保存,建议放-80冰箱里。2、不知道楼主有没有杂内参?内参表达正常吗?如果内参没问题,那就说明不是系统造成的,应该是你的条带就是这么大。有没有查过相关文献?目的蛋白条带是多少,或者查看抗体试剂盒说明书,看看条带是不是18K
这个蛋白条带位置不对原因很多了。比如蛋白翻译后的修饰糖基化等这个修饰会增加蛋白的分子量。比如翻译后的剪切成为前体活性蛋白。比如基因的不同剪切体等。楼主可以先查一下基因的剪切体先排除剪切体的可能。还有就是看看别的公司的抗体看看是否有35KD以上的蛋白条带。也可以换抗体试试说不定换个国产的就好了呢。嘿嘿。最后不行直接问抗体的公司吧。
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