我最近在做酵母的，ROS用的是碧云天的
试剂盒，DCFH-DA法，
流式细胞仪测定，但是测定下来发现，每一组样品，包括阳性对照组的ROS含量都很低，感觉染料没有染上，操作步骤如下：
1.取样100微升，用PBS洗涤两次
2.加入1 mL提前稀释好的DCFH-DA（提前用PBS稀释，至浓度10 µmol/L），重悬，细胞浓度为1*106cfu/mL，（OD600约0.1~0.2之间）
3.37 ℃培养箱中培养25 min，每隔4 min，对细胞上下颠倒一次，使得染液与细胞充分接触
4.细胞被
荧光染料充分标记后，离心，PBS洗1~2次，（将未进入细胞的荧光染料去除）收集沉淀，用PBS重悬，加入流式管中，等待检测
5.流式检测用FLI通道，488nm激发，发射波长525 nm，检测各样品荧光强度。
一直找不到合适的原因，请大神赐教，万分感谢！
